第十七章流式細胞儀分析技術及應用-文庫吧資料
2024-10-19 11:50本頁面
【正文】 對 488nm的激發(fā)光波長有較強的吸收 ? 發(fā)射光波長與激發(fā)光波長間有較大的波長差 ? 易與標記單抗結(jié)合而不影響抗體的特異性 二、常用的熒光染料與標記染色 FITC Texas red PEcy5 FL1 FL2 FL3 FL4 激光 細胞懸液 異硫氰酸熒光素 得州紅 能量傳遞復合染料 藻膽蛋白類 （一）幾種常見的熒光染料 名稱 染料 激發(fā)波長 熒光顏色 溶解性 對 PH敏感性 特點 異硫氰酸熒光素 FITC 488 綠 525 易 敏感 易溶于水，與抗體結(jié)合不影響特異性 得州紅 Texas red 568 紅 615 不易 不敏感 穩(wěn)定，偶聯(lián)后量子產(chǎn)額低 藻紅蛋白 PE 488 橙 575 易 不敏感 具較多發(fā)光基團，消光系數(shù)和量子產(chǎn)額高 藻青蛋白 PC 488 別藻青蛋白 APC 633 紅 670 能量傳遞復合染料 PEcy5 488 紅 670 易 不敏感 減少交叉，成本高 常用的幾類熒光染料 用化學法將兩種不同激發(fā)波長的染料結(jié)合在一起，在 488nm激發(fā)光照射下，通過一個熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光信號，從而檢測到該特定熒光信號。 三、設門分析技術 A 淋巴細胞 B 單核細胞 C 中性粒細胞 A、 B、 C均為任意門 線性門 ? Region設置 : 區(qū)閾（ region, R）與門 (gate, G ) 是兩個相關的概念，區(qū)閾可與門對應，但是也可以包含于門。 （四）流式細胞儀的多參數(shù)分析 Gate設置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細胞群分布選定其中想要分析的特定細胞群，并要求該樣本所有其他參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細胞的分布情況。 ? 等高線越密集則表示細胞數(shù)變化率越大。 ? 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細胞相對或絕對數(shù)，即 “ 等高 ” 。 ? 雙參數(shù)信號 通常采用對數(shù)信號，最常用的是點密圖，在圖中，每個點代表一個細胞，點圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強度的顆粒數(shù)量的多少。 （二）分選的技術要求 ? 參數(shù)： FS,SS,FL ? 數(shù)據(jù)顯示方式 （單參數(shù)直方圖 、雙參數(shù)散點圖 、二維等高圖 、假三維等高圖 、三參數(shù)散點圖 ） ? 設門分析技術 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 FS：反映顆粒的大小 SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復雜程度 FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少 一、 參數(shù) ? 單參數(shù)直方圖 ? 雙參數(shù)直方圖 :點圖 二維等高圖 假三維等高圖 ? 三參數(shù)直方圖 ? 多參數(shù)分析 直分析方圖 設門分析 :REGION和 GATE設置 二、數(shù)據(jù)顯示方式 由一維參數(shù) (散射光或熒光 )與顆粒計數(shù)(COUNT)構(gòu)成，反映同樣散射光或熒光強度的顆粒數(shù)量的多少。 ? 分選得率： 從一群體細胞懸液中分辨出目的細胞的總量，再經(jīng)分選后得到目的細胞的實際得率。 ? 分選收獲率： 實際收獲的分選細胞與設定通過測量點的分選細胞之間的比率。與懸液中細胞的
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