第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-wenkub
2022-10-22 11:50:32 本頁面
【正文】 示方式 三、設(shè)門分析技術(shù) 第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測樣品制備 二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色 三、免疫膠乳顆粒的應(yīng)用 四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型 四、腫瘤耐藥相關(guān)蛋白分析 五、 AIDS病檢測中的應(yīng)用 六、自身免疫性疾病相關(guān) HLA抗原分析 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 小結(jié) 流式細(xì)胞術(shù) (flow cytometry, FCM)是以流式細(xì)胞儀為檢測手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 一、工作原理 （ 1） 液流系統(tǒng) （ 2） 光學(xué)系統(tǒng) （ 3） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) ： ? 由樣本和鞘液組成 ? 待測細(xì)胞 單個(gè)細(xì)胞的懸液 熒光染料標(biāo)記的單抗對(duì)其染色 受清潔氣體壓力 從樣品管進(jìn)入流動(dòng)室形成樣本流 ? 鞘液：輔助樣本流被正常檢測的基質(zhì)液。 二、散射光的測定 前向散射光 （ forward scatter, FS） ： 激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以相對(duì)軸較小角度 (176。 角散射的訊號(hào)，用于檢測細(xì)胞 內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性。 ? 每種熒光染料會(huì)產(chǎn)生特定波長的熒光和顏色，通過波長選擇通透性濾片，可將不同波長的散射光和熒光信號(hào)區(qū)分開，送入不同的光電倍增管。與懸液中細(xì)胞的含量成正比。 ? 分選得率： 從一群體細(xì)胞懸液中分辨出目的細(xì)胞的總量，再經(jīng)分選后得到目的細(xì)胞的實(shí)際得率。 ? 雙參數(shù)信號(hào) 通常采用對(duì)數(shù)信號(hào)，最常用的是點(diǎn)密圖，在圖中，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，點(diǎn)圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。 ? 等高線越密集則表示細(xì)胞數(shù)變化率越大。 三、設(shè)門分析技術(shù) A 淋巴細(xì)胞 B 單核細(xì)胞 C 中性粒細(xì)胞 A、 B、 C均為任意門 線性門 ? Region設(shè)置 : 區(qū)閾（ region, R）與門 (gate, G ) 是兩個(gè)相關(guān)的概念，區(qū)閾可與門對(duì)應(yīng)，但是也可以包含于門。因檢測速度極快，所以又有 “ 液相芯片 ” 之稱 。 Flowcheck Flowset Flowcount （三）儀器操作的質(zhì)控 ? 同型對(duì)照：即免疫熒光標(biāo)記中的陰性對(duì)照，選用相同源性的 未標(biāo)記單抗 作為對(duì)照調(diào)整和設(shè)置電壓，以保證特異性。 Tc(CD3+CD4CD8+T) B淋巴細(xì)胞及其亞群分析 B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生 IgM型自身抗體 , 參與免疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān) B2(CD19+CD5):受外來抗原刺激 , 產(chǎn)生高親和性特異性抗體 NK細(xì)胞分析 NK(CD3CD16+CD56+) 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 ? 細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn) (死細(xì)胞與活細(xì)胞比例 ) ? 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型 ?對(duì)淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型 ?用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變 CD4+Th細(xì)胞、 CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示對(duì)化療藥物耐藥 四、腫瘤耐藥基因分析 五、 AIDS病檢測中
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