第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-展示頁(yè)
2024-10-23 11:50本頁(yè)面
【正文】 含量成正比。 ? 線性放大器和對(duì)數(shù)放大器 三、熒光測(cè)量 熒光染料的特性 ?激發(fā)波長(zhǎng) (EXCITING) ?發(fā)射波長(zhǎng) (EMISSION) 熒光補(bǔ)償 通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分選主要是在對(duì)具有某種特征的細(xì)胞需進(jìn)一步培養(yǎng)和研究時(shí)進(jìn)行的。 ? 每種熒光染料會(huì)產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的熒光和顏色，通過(guò)波長(zhǎng)選擇通透性濾片，可將不同波長(zhǎng)的散射光和熒光信號(hào)區(qū)分開(kāi)，送入不同的光電倍增管。 此為血細(xì)胞分類的基本原理，但不能分析表面分子。 角散射的訊號(hào)，用于檢測(cè)細(xì)胞 內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性。 )向前方散射的訊號(hào)用于檢測(cè)細(xì)胞等粒子的表面屬性，信號(hào)強(qiáng)弱與細(xì)胞體積大小成正比 。 二、散射光的測(cè)定 前向散射光 （ forward scatter, FS） ： 激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以相對(duì)軸較小角度 (176。 （ 1）液流系統(tǒng) 噴嘴 Fluorescence signals Focused laser beam 鞘液 液流系統(tǒng)示意圖 FCM的液流系統(tǒng)（如何形成單個(gè)細(xì)胞流） 樣本管 鞘液管 ? 激光光源：氣冷式氬離子激光器 ? 分色反光鏡：反射長(zhǎng) /短波長(zhǎng)，通過(guò)短 /長(zhǎng)波長(zhǎng) ? 光束成形器：兩十字交叉放置的透鏡 ? 透鏡組：形成平行光，除去室內(nèi)光 ? 濾片：長(zhǎng)通、短通、帶通 ? 光電倍增管： FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（熒光） （ 2）光學(xué)系統(tǒng) Flow Tip Laser SS and FL Detector FS Detector 光學(xué)系統(tǒng)示意圖 主要由計(jì)算機(jī)及其軟件組成 （ 3）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 基本工作原理 單細(xì)胞液柱 已標(biāo)記的單細(xì)胞懸液和鞘液 硅化管 流動(dòng)室 噴嘴 熒光檢測(cè)系統(tǒng)和 散射光感受系統(tǒng) 收集光信號(hào) 熒光染料被激發(fā)發(fā)光 光電倍增管 脈沖信號(hào) 計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析結(jié)果 放大 垂直相交 形成穩(wěn)態(tài) 水平激光與之 基本過(guò)程 區(qū)別 流式細(xì)胞儀 顯微鏡 光源 激光 自然光、燈光 對(duì)象 細(xì)胞、生物粒子 細(xì)胞、組織等 承載工具 鞘液及流動(dòng)室 載玻片 檢測(cè)信號(hào) 光學(xué)信號(hào) 形態(tài)及染色 放大方式 PMT、放大電路 目鏡 物鏡、光學(xué)放大 統(tǒng)計(jì) 計(jì)算機(jī)， 5000 人工， 200 結(jié)果 多參數(shù)，綜合分析 簡(jiǎn)單，單參數(shù) 流式細(xì)胞儀與顯微鏡的區(qū)別 細(xì)胞在液柱中與激光束相交時(shí)向周圍 360176。 一、工作原理 （ 1） 液流系統(tǒng) （ 2） 光學(xué)系統(tǒng) （ 3） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) ： ? 由樣本和鞘液組成 ? 待測(cè)細(xì)胞 單個(gè)細(xì)胞的懸液 熒光染料標(biāo)記的單抗對(duì)其染色 受清潔氣體壓力 從樣品管進(jìn)入流動(dòng)室形成樣本流 ? 鞘液：輔助樣本流被正常檢測(cè)的基質(zhì)液。 細(xì)胞不被破壞，測(cè)量快速、大量、準(zhǔn)確、靈敏、定量 流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn) 流式細(xì)胞儀 是測(cè)量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀，是在單個(gè)細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的對(duì)細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、 RNA、蛋白質(zhì)、抗原等）進(jìn)行快速測(cè)量并可分類收集的高技術(shù)。第十七章 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用 第一節(jié) 概述
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