第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-wenkub.com
2024-10-07 11:50 本頁面
【正文】 ?對各項工作環(huán)節(jié)和儀器性能進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，是保證 FCM分析中各項檢測數(shù)據(jù)和指標(biāo)可靠性的關(guān)鍵。 3. 何謂熒光補(bǔ)償？何謂“液相芯片”技術(shù)？ 4. 細(xì)胞分選的基本原理。 第四節(jié) 在免疫學(xué)檢驗中的應(yīng)用 T淋巴細(xì)胞及其亞群分析 Th(CD3+CD4+CD8T)。 ? 絕對計數(shù)校準(zhǔn) : 保證計數(shù)的準(zhǔn)確性。 能量傳遞復(fù)合染料 PE CY5 CY5 CY5 488nm 575nm 670nm 紅色熒光 花青苷 5 藻紅蛋白 能量傳遞復(fù)合染料機(jī)制 ?熒光染料與細(xì)胞成分的四種結(jié)合方式 結(jié)構(gòu)親和式 嵌入結(jié)合 共價鍵結(jié)合 熒光標(biāo)記抗體特異性結(jié)合 ?免疫熒光標(biāo)記方法 直標(biāo) :干擾少 ,但需購買多種單抗 間標(biāo) :步驟多 ,干擾多 ,不需標(biāo)記多種抗體 組合標(biāo)記 （二）免疫熒光標(biāo)記 ? 免疫膠乳顆粒的應(yīng)用即液相芯片技術(shù) 是把微小的乳膠微球分別染成上百種不同的熒光色，把針對不同檢測物的乳膠微球混合后再加入待標(biāo)本，在懸液中與微粒進(jìn)行特異性地結(jié)合，經(jīng)激光照射后不同待測特產(chǎn)生不同顏色，并可進(jìn)行定量分析。 根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形門、圓形門、多邊形門、任意形狀門和十字門。 ? 曲線層次越高 (越里面的線 ) 所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。 （一）單參數(shù)直方圖 單參數(shù)直方圖 細(xì)胞相對數(shù)量 信道(channel ) ? 雙參數(shù)直方圖：縱軸和橫軸分別代表被測量細(xì)胞的兩個測量參數(shù)，根據(jù)這兩個參數(shù)就可以確定細(xì)胞在圖上的表達(dá)位置。與純度成反比。 四、細(xì)胞分選原理 細(xì)胞懸液形成液流柱 流動室振動 液流斷裂成液滴 空白液滴 含細(xì)胞的液滴 棄去 偏轉(zhuǎn)落入收集器 壓電晶體 產(chǎn)生 機(jī)械振動 不充電 充電 （一）分選基本原理 ? 分選速度： 單位時間內(nèi)分選的細(xì)胞數(shù)量。 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 光散射測量最有效用途： 從非均一群體中鑒別出某些亞群 ? 熒光信號由被檢細(xì)胞上標(biāo)記的特異性熒光染料受激發(fā)后產(chǎn)生，發(fā)射的熒光波長與激發(fā)光波長不同。 FALS Sensor Laser 前向散射光示意圖 側(cè)向散射光（ side scatter, SS）： 激光束照射細(xì)胞時，光以 90176。 立體角方向散射的光線信號，它的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小、形狀、胞內(nèi)顆粒折射等有關(guān)，主要分為 前向散射光 和 側(cè)向散射光 。 第一節(jié) 概述 細(xì)胞組成 細(xì)胞功能 大小 細(xì)胞表面 /胞漿 /核 特異性抗原 粒度 細(xì)胞活性 DNA, RNA含量 胞內(nèi)細(xì)胞因子 蛋白質(zhì)含量 激素結(jié)合位點(diǎn) 鈣離子 , PH值 , 膜電位 酶活性 流式細(xì)胞儀常檢測的細(xì)胞特性 ?采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率； ?利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，保證檢測的靈敏度和特異性； ?用計算機(jī)系統(tǒng)對流動的單細(xì)胞懸液中單個細(xì)胞的多個參數(shù)信號進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，保證了檢測速度與統(tǒng)計分析精確性。第十七章 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用 第一節(jié) 概述 一、工作原理 二、散射光的測定 三、熒光測量 四、細(xì)胞分選原理 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 一、參數(shù) 二、數(shù)據(jù)顯
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