第十七章流式細胞儀分析技術及應用-文庫吧
2024-09-21 11:50 本頁面
【正文】 Tip Laser SS and FL Detector FS Detector 光學系統(tǒng)示意圖 主要由計算機及其軟件組成 （ 3）數(shù)據處理系統(tǒng) 基本工作原理 單細胞液柱 已標記的單細胞懸液和鞘液 硅化管 流動室 噴嘴 熒光檢測系統(tǒng)和 散射光感受系統(tǒng) 收集光信號 熒光染料被激發(fā)發(fā)光 光電倍增管 脈沖信號 計算機系統(tǒng)分析結果 放大 垂直相交 形成穩(wěn)態(tài) 水平激光與之 基本過程 區(qū)別 流式細胞儀 顯微鏡 光源 激光 自然光、燈光 對象 細胞、生物粒子 細胞、組織等 承載工具 鞘液及流動室 載玻片 檢測信號 光學信號 形態(tài)及染色 放大方式 PMT、放大電路 目鏡 物鏡、光學放大 統(tǒng)計 計算機， 5000 人工， 200 結果 多參數(shù)，綜合分析 簡單，單參數(shù) 流式細胞儀與顯微鏡的區(qū)別 細胞在液柱中與激光束相交時向周圍 360176。 立體角方向散射的光線信號，它的強弱與細胞的大小、形狀、胞內顆粒折射等有關，主要分為 前向散射光 和 側向散射光 。 二、散射光的測定 前向散射光 （ forward scatter, FS） ： 激光束照射細胞時，光以相對軸較小角度 (176。 ～ 10176。 )向前方散射的訊號用于檢測細胞等粒子的表面屬性，信號強弱與細胞體積大小成正比 。 FALS Sensor Laser 前向散射光示意圖 側向散射光（ side scatter, SS）： 激光束照射細胞時，光以 90176。 角散射的訊號，用于檢測細胞 內部結構屬性。 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 側向散射光 示意圖 測得的 FS與 SS信號通過計算機處理，可得到 FSSS圖，由此可僅用散射光信號對未染色的活細胞進行分析或分選。 此為血細胞分類的基本原理，但不能分析表面分子。 淋巴細胞 單核細胞 中性粒細胞 光散射測量最有效用途： 從非均一群體中鑒別出某些亞群 ? 熒光信號由被檢細胞上標記的特異性熒光染料受激發(fā)后產生，發(fā)射的熒光波長與激發(fā)光波長不同。 ? 每種熒光染料會產生特定波長的熒光和顏色，通過波長選擇通透性濾片，可將不同波長的散射光和熒光信號區(qū)分開，送入不同的光電倍增管。 ? 選擇不同的單抗及染料就可同時測定一個細胞上的多個不同特征。 ? 線性放大器和對數(shù)放大器 三、熒光測量 熒光染料的特性 ?激發(fā)波長 (EXCITING) ?發(fā)射波長 (EMISSION) 熒光補償 通過流式細胞儀進行細胞分選主要是在對具有某種特征的細胞需進一步培養(yǎng)和研究時進行的。 四、細胞分選原理 細胞懸液形成液流柱 流動室振動 液流斷裂成液滴 空白液滴 含細胞的液滴 棄去 偏轉落入收集器 壓電晶體 產生 機械振動 不充電 充電 （一）分選基本原理 ? 分選速度： 單位時間內分選的細胞數(shù)量。與懸液中細胞的含量成正比。 ? 分選純度： 分選出的目的細胞占所有收獲細胞的百分率。 ? 分選收獲率： 實際收獲的分選細胞與設定通過測量點的分選細胞之間的比率。與純度成反比。 ? 分選得率： 從一群體細胞懸液中分辨出目的細胞的總量，再經分
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