第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用(參考版)
2024-10-15 11:50本頁面
【正文】 。 ?同型對照為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，可使熒光標(biāo)記單抗的信號保持其特異性。 5. FCM分析中有哪些數(shù)據(jù)顯示方式，如何解讀結(jié)果及其設(shè)門分析的意義？ 6. 如何進(jìn)行 FCM分析檢測樣品的制備？ 7. 流式細(xì)胞分析前如何驗證儀器工作狀態(tài)，采用何種校正物？ 8. 流式細(xì)胞免疫分析的質(zhì)量控制包括哪些方面？ 9. 流式細(xì)胞術(shù)有哪些臨床應(yīng)用價值？ 10. 流式細(xì)胞儀分析中常見的熒光素有那些？他們的特性如何？ 小 結(jié) ?流式細(xì)胞術(shù)（ FCM）是在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號實現(xiàn)對單個細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 1. 流式細(xì)胞儀的分析檢測原理是什么？ 2. 流式細(xì)胞儀分析中前向散射光、側(cè)向散射光和熒光的檢測意義。 Tc(CD3+CD4CD8+T) B淋巴細(xì)胞及其亞群分析 B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生 IgM型自身抗體 , 參與免疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān) B2(CD19+CD5):受外來抗原刺激 , 產(chǎn)生高親和性特異性抗體 NK細(xì)胞分析 NK(CD3CD16+CD56+) 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 ? 細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗 (死細(xì)胞與活細(xì)胞比例 ) ? 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型 ?對淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型 ?用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變 CD4+Th細(xì)胞、 CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示對化療藥物耐藥 四、腫瘤耐藥基因分析 五、 AIDS病檢測中的應(yīng)用 HLAB27可出現(xiàn)在 58%～ 97%的強直性脊椎炎 (As) 患者 六、自身免疫病相關(guān) HLA抗原分析 FCM作為一個強大的技術(shù)平臺，已應(yīng)用于多個領(lǐng)域，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。 （四）免疫檢測的質(zhì)控 流式細(xì)胞術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用各方面，用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞的特性，為細(xì)胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 Flowcheck Flowset Flowcount （三）儀器操作的質(zhì)控 ? 同型對照：即免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，選用相同源性的 未標(biāo)記單抗 作為對照調(diào)整和設(shè)置電壓，以保證特異性。 ? PMT（光電倍增管）校準(zhǔn) : 保證樣品檢測時儀器處于最佳靈敏度工作狀態(tài)。因檢測速度極快，所以又有 “ 液相芯片 ” 之稱 。 ? 樣本制備 ? 標(biāo)記染色 ? 液相芯片技術(shù) ? 質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求 ?外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備 分離單個核細(xì)胞 ?培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備 蛋白酶消化 機械吹打 使貼壁細(xì)胞脫落 洗滌 尼龍網(wǎng)過濾 單細(xì)胞懸液 一、免疫檢測樣品制備 ?新鮮實體組織單細(xì)胞懸液的制備 ? 機械法 ? 酶處理法 ? 化學(xué)試劑處理法 ? 表面活性劑處理法 ?單細(xì)胞懸液的保存 ? 深低溫保存法（一年） ? 乙醇或甲醇保存法（ 2周） ? 甲醛或多聚甲醛保存法（ 2月） 適用條件 : ? 有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù) ?
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