【正文】 HydroBios 55?m（信安儀器 0223654317） 。體積 5 公升。體積 5 公升。體積 20公升。 352052（泛泰公司 0800213029） BD Falcon 352235 試管 附濾網(wǎng) FALCON試管，上機(jī)前去除樣品中之細(xì)胞團(tuán)塊，防止管路堵塞。如果樣本管支撐架位于旁位時(shí)，聽不到真空幫浦的工作聲音，可能是真空幫浦停了，關(guān)閉 FACSCalibur，再啟動(dòng)；移開支撐架時(shí)，如果馬達(dá)仍然不動(dòng)，請(qǐng)致電 BD客戶服務(wù)部門尋求幫助。 ? 更換上樣針上部的 O型膠環(huán)。若流動(dòng)室中存在氣泡，可能使樣本流的位置偏離激光束，導(dǎo)致無細(xì)胞信號(hào)。如果未更新，說明儀器與計(jì)算機(jī)之間的通訊發(fā)生了故障，此時(shí)，應(yīng)關(guān)閉計(jì)算機(jī)和 FACSCalibur，重新打開儀器，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。 ? 檢查閾值是否設(shè)置過高，導(dǎo)致無法檢測(cè)目標(biāo)細(xì)胞群。 ? 如果 STATUS窗日顯示 READY，則檢查樣本管中細(xì)胞濃度是否夠，上樣前是否混勻了。如果鞘液筒吸干了，應(yīng)該重新裝滿鞘液，然后先取下樣品管進(jìn)行 510次 PRIME，再換上 3ml dH2O上樣管 HI RUN 30分鐘，待鞘液流中的氣泡排除之后，再進(jìn)行樣本測(cè)定。 儀器訊號(hào)噪 聲過高 鞘液過濾器中有氣泡，儀器記錄了氣泡產(chǎn)生的信號(hào)，造成了噪聲數(shù)據(jù)的干擾。 ? 上樣針上的 Bal seal是否己磨損。 ? 鞘液筒是否漏氣（蓋緊鞘液筒蓋）。此時(shí)，樣本不能良好地進(jìn)入流動(dòng)室，無法檢測(cè)。 儀器處于 STANDBY 狀況（儀器失壓） 如果儀器未加壓，上樣管放好后，雖然控制面板處于 RUN模式，但儀器仍未能達(dá)到READY狀況，此時(shí)儀器仍處于 STANDBY狀況。 ? 開機(jī)需要 5分鐘時(shí)間預(yù)熱。（汰換 Bal seal） 儀器處于 N0T READY 狀況 檢查以下情況： ? 鞘液筒中的鞘液是否用完。旋轉(zhuǎn)調(diào)整試管支持架（順時(shí)鐘向下、逆時(shí)鐘向上）。 常見故障排除 程序 樣品試管上不去 ? 誤用不適合的試管。 Standby：儀器在 Standby 狀態(tài)、或儀器在 Run 狀態(tài)而無樣本管在進(jìn)樣區(qū)上、或支撐架位于側(cè)位、 或樣本管未完全加壓。 狀態(tài)： 顯示儀器運(yùn)行模式 Not Ready：激光器正在預(yù)熱、鞘液桶空、廢液桶滿。 FACS101 Handbook 22 – 五、錯(cuò)誤信號(hào)、疑難排除 儀器狀態(tài)（ Status）： 在 CELLQuest菜單位于 Cytometer菜單中?？烧{(diào)整圈選區(qū)域， Markers界限，軟件會(huì)重新計(jì)算、統(tǒng)計(jì)報(bào)告。 12. 對(duì)于 存在不同檔案匣之系列檔案，可用鼠標(biāo)以拖曳方式選取所有圖表 (文件中所有圖譜的四角會(huì)出現(xiàn)黑色方塊，表示被選擇上 ) ，接著從 Plots菜單選擇 Change Data Files，并在隨后出現(xiàn)之對(duì)話方框，選擇所在新目錄與欲分析 檔案 。在出現(xiàn)方框中命名檔案，并決定欲存放檔案匣，點(diǎn)擊 Save。 FACS101 Handbook 21 – 打印報(bào)告、輸出統(tǒng)計(jì)數(shù)值 9. 從屏幕上方 File菜單中選擇 Print One，可以打印工作中實(shí)驗(yàn)文件。重復(fù)前述步驟以增畫另一 Marker，一般而言 M2 始自 M1 的右緣，終于圖的右界。 7. 從屏幕左列工具板中，選取 Histogram Marker 工具，然后在圖的左緣處點(diǎn)擊并拖曳至定點(diǎn)，一般而 言是陰性信號(hào)的右緣。 6. 點(diǎn)擊 Parameter 鈕來顯示 NORM001 檔案中所有的參數(shù)項(xiàng)，將參數(shù)項(xiàng)改成「 FL2H 256 Gamma2」。點(diǎn)擊 Select File 鈕，再點(diǎn)擊 Open來開啟 NORM001 檔案。刪除 R1區(qū)域后，可用繪圖工具板，重畫 R1。你已完成 R1區(qū)域的界定，我們將以此區(qū)域來圈選淋巴細(xì)胞。 X 與 Y 參數(shù)項(xiàng)會(huì)出現(xiàn)默認(rèn)值 —FSCH 256 與 SSCH 256，在 Color方框中點(diǎn)擊 Multicolor Gating，確認(rèn)無誤之后，點(diǎn)擊 OK 便完成了一個(gè) NORM001 的 FSC /SSC散點(diǎn)圖。 3. 在 Dot Plot方框中， Plot Source應(yīng)預(yù)設(shè)為 Analysis，可 點(diǎn)擊 Select File 鈕，并用隨后之方框來開啟 預(yù) 存之 Sample Files，它們的路徑位于 Mac HD： BD Applications： CellQuest Folder： Sample Files。在實(shí)驗(yàn)文件的空白區(qū)點(diǎn)擊，然后 拖曳 對(duì)角線至適當(dāng)大小。桌面會(huì)出現(xiàn)一 ‘Untitled‘ 實(shí)驗(yàn)文件，可點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)文件的右上角的放大鈕，將實(shí)驗(yàn)文件窗口放大。 13. 常規(guī)使用之實(shí)驗(yàn)文件 (內(nèi)含散點(diǎn)圖、圈選區(qū)格、四象限分界、以及統(tǒng)計(jì)報(bào)告 ) ，我們建議您將它另存新檔 File – Save As，以備后需， 分析其它檔案便輕而易舉。點(diǎn)擊OPEN。 FACS101 Handbook 18 – 開啟 其它 List Mode Data 11. 如欲接著分析存在同一檔案匣之系列檔案 ，可用鼠標(biāo)以拖曳方式選取所有圖表 (文件中所有圖譜的四角會(huì)出現(xiàn)黑色方塊，表示被選擇上 ) ，接著從 Plots菜單選擇Next Data File，軟件會(huì)自動(dòng)以新檔案來替換現(xiàn)有檔案，您只要確認(rèn)圈選范圍、與 Quadrant Marker 的位置是否恰當(dāng)，即可 打印報(bào)告、或輸出統(tǒng)計(jì)數(shù)值 。 10. 點(diǎn)選 四象限統(tǒng)計(jì)表， 從屏幕上方 File菜單中選擇 Export Statistics可 輸出統(tǒng)計(jì)數(shù)值至 Excel檔案。 可以得到該圖之四象限統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 FACS101 Handbook 17 – 7. 從屏幕左列工具板中，選取 Quadrant Marker 工具，然后在 FL1/ FL2 散點(diǎn)圖中心處點(diǎn)擊并拖曳至定點(diǎn)，一般而言是緊挨著陰性細(xì)胞聚落。 6. 點(diǎn)擊 OK 便完成了一個(gè)以 G1 圈選的 FL1/ FL2 散點(diǎn) 圖，可將復(fù)制圖移至原圖右方。點(diǎn)擊 X Parameter 鈕來顯示 NORM001 檔案中所有的參數(shù)項(xiàng) (FSC, SSC, FL1, FL2) 將 X 參數(shù)項(xiàng)改成「 FL1H 256 Gamma1」， Y 參數(shù)項(xiàng)改成「 FL2H 256 Gamma2」。刪除 R1區(qū)域后，可用繪圖工具板，重畫 R1。你已完成 R1區(qū)域的界定，我們將以此區(qū)域來圈選淋巴細(xì)胞。 X 與 Y 參數(shù)項(xiàng)會(huì)出現(xiàn)默認(rèn)值 —FSCH 256 與 SSCH 256， 在 Color方框 中點(diǎn)擊 Multicolor Gating，確認(rèn)無誤之后，點(diǎn)擊 OK 便完成了一個(gè) NORM001 的 FSC /SSC散點(diǎn)圖。 FACS101 Handbook 16 – 3. 在 Dot Plot方框中， Plot Source應(yīng)預(yù)設(shè)為 Analysis，可 點(diǎn)擊 Select File 鈕，并用隨后之方框來開啟 預(yù) 存之 Sample Files，它們的路徑位于 Mac HD： BD Applications： CellQuest Folder： Sample Files。在實(shí)驗(yàn)文件的空白區(qū)點(diǎn)擊，然后拖動(dòng)對(duì)角線至適當(dāng)大小。桌面會(huì)出現(xiàn)一 ‘Untitled‘ 實(shí)驗(yàn)文件，可點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)文件的右上角的放大鈕，將實(shí)驗(yàn)文件窗口放大。一般軟件無法打開 list mode數(shù)據(jù)文件，需藉助如 CellQuest, WinList, WinMDI, 等 Flow 分析軟件 ，才可開啟、繪圖、并進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。 關(guān)主機(jī)、關(guān)計(jì)算機(jī) FACS101 Handbook 15 – 四、數(shù)據(jù)分析 FCS list mode 數(shù)據(jù)文件： 說明： FCS list mode 數(shù)據(jù)文件 是流式細(xì)胞儀的標(biāo)準(zhǔn)格式檔案（