第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用(已修改)
2024-10-27 11:50 本頁面
【正文】 第十七章 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用 第一節(jié) 概述 一、工作原理 二、散射光的測定 三、熒光測量 四、細(xì)胞分選原理 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 一、參數(shù) 二、數(shù)據(jù)顯示方式 三、設(shè)門分析技術(shù) 第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測樣品制備 二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色 三、免疫膠乳顆粒的應(yīng)用 四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型 四、腫瘤耐藥相關(guān)蛋白分析 五、 AIDS病檢測中的應(yīng)用 六、自身免疫性疾病相關(guān) HLA抗原分析 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 小結(jié) 流式細(xì)胞術(shù) (flow cytometry, FCM)是以流式細(xì)胞儀為檢測手段的一項(xiàng)能快速、精確的對單個(gè)細(xì)胞理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號(hào)對細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。 細(xì)胞不被破壞，測量快速、大量、準(zhǔn)確、靈敏、定量 流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn) 流式細(xì)胞儀 是測量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀，是在單個(gè)細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、 RNA、蛋白質(zhì)、抗原等）進(jìn)行快速測量并可分類收集的高技術(shù)。 第一節(jié) 概述 細(xì)胞組成 細(xì)胞功能 大小 細(xì)胞表面 /胞漿 /核 特異性抗原 粒度 細(xì)胞活性 DNA, RNA含量 胞內(nèi)細(xì)胞因子 蛋白質(zhì)含量 激素結(jié)合位點(diǎn) 鈣離子 , PH值 , 膜電位 酶活性 流式細(xì)胞儀常檢測的細(xì)胞特性 ?采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率； ?利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，保證檢測的靈敏度和特異性； ?用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對流動(dòng)的單細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，保證了檢測速度與統(tǒng)計(jì)分析精確性。 一、工作原理 （ 1） 液流系統(tǒng) （ 2） 光學(xué)系統(tǒng) （ 3） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) ： ? 由樣本和鞘液組成 ? 待測細(xì)胞 單個(gè)細(xì)胞的懸液 熒光染料標(biāo)記的單抗對其染色 受清潔氣體壓力 從樣品管進(jìn)入流動(dòng)室形成樣本流 ? 鞘液：輔助樣本流被正常檢測的基質(zhì)液。主要作用是包裹樣本流的周圍，保持樣本流中細(xì)胞處于噴嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。 （ 1）液流系統(tǒng) 噴嘴 Fluorescence signals Focused laser beam 鞘液 液流系統(tǒng)示意圖 FCM的液流系統(tǒng)（如何形成單個(gè)細(xì)胞流） 樣本管 鞘液管 ? 激光光源：氣冷式氬離子激光器 ? 分色反光鏡：反射長 /短波長，通過短 /長波長 ? 光束成形器：兩十字交叉放置的透鏡 ? 透鏡組：形成平行光，除去室內(nèi)光 ? 濾片：長通、短通、帶通 ? 光電倍增管： FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（熒光） （ 2）光學(xué)系統(tǒng) Flow
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