20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀概述-文庫吧資料
2024-11-15 05:38本頁面
【正文】 敏度是指能夠檢測到的最小顆粒大小(d224。li225。,第四十二頁，共七十二頁。o)性能指標(biāo),一、熒光測量靈敏度 靈敏度的高低(gāodī)是衡量儀器檢測微弱熒光信號的重要指標(biāo)。,第四十一頁，共七十二頁。采用List Mode方式可大量節(jié)約內(nèi)存和磁盤容量。,（六）FCM測量數(shù)據(jù)的存貯、顯示與分析 目前FCM數(shù)據(jù)的存貯的方式均采用列表排隊(List Mode)方式。下落的水滴通過一對平行板電極形成的靜電場時，帶正電荷的水滴向帶負(fù)電的電極板偏轉(zhuǎn)，這樣就可用容器收集水滴。,3．水滴的充電與偏轉(zhuǎn) 當(dāng)水滴從流束上將要(jiāngy224。ng)區(qū)時判斷出哪個細(xì)胞滿足了分選的條件，并產(chǎn)生一個邏輯信號，此信號驅(qū)動充電脈沖發(fā)生器，使之產(chǎn)生充電脈沖。,2．邏輯電路 為了分選細(xì)胞，需要細(xì)胞在經(jīng)過測量(c232。若每秒鐘流出的細(xì)胞是1000個，則平均每40個水滴中只有一個水滴是有細(xì)胞的，其他皆為空白。j236。 噴嘴的振動頻率即每秒鐘產(chǎn)生水滴的數(shù)目。,第三十六頁，共七十二頁。ng 233。,圖中點(diǎn)A通過透鏡f成像在A’處，而點(diǎn)B通過透鏡f成像在B’處。)光譜的范圍，F(xiàn)ITC探測器會探測到少量的PE光譜，而PE探測器則檢測到較多的FITC光譜。,第三十四頁，共七十二頁。,（3）光譜重疊的校正 當(dāng)細(xì)胞攜帶兩種熒光受激光激發(fā)而發(fā)射兩種不同波長的熒光時，理論上可選擇(xuǎnz233。 熒光信號的寬度常用來區(qū)分雙連體細(xì)胞。,（2）熒光信號的面積和寬度 熒光信號的面積是采用對熒光光通量進(jìn)行積分測量，一般對DNA倍體測量時采用面積，這是因為熒光脈沖的面積比熒光脈沖的高度更能準(zhǔn)確(zhǔnqu232。在細(xì)胞膜表面抗原等的熒光檢測時通常使用對數(shù)放大器。,2.熒光信號 （1）熒光信號線性測量和對數(shù)測量線性放大器的輸出與輸入是線性關(guān)系，細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測量一般選用(xuǎny242。一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，稱為細(xì)胞自發(fā)熒光；另一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記細(xì)胞后，受激發(fā)照射得到的熒光信號，通過對這類熒光信號的檢測和定量分析能了解所研究細(xì)胞的性質(zhì)和數(shù)量。nh224。,第三十頁，共七十二頁。ngpǐn)的制備技術(shù)(如染色)，稱為細(xì)胞的物理參數(shù)（或稱固有參數(shù)）。,第二十九頁，共七十二頁。,（四）信號檢測與分析(fēnxī) 當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過激光照射區(qū)時，細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)產(chǎn)生不同波長的熒光信號。)的光通過。 濾光片主要分為： 1.長通濾光片 長通濾光片使特定波長以上的光通過。,第二十七頁，共七十二頁。,由于激光焦點(diǎn)處能 量分布為正態(tài)分布（見 圖），中心處能量最高。o)區(qū)的時間僅為1μs左右，且細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號強(qiáng)弱，與被照射的時間和激發(fā)光的強(qiáng)度有關(guān)，因此細(xì)胞必須達(dá)到足夠的光照強(qiáng)度。o)。,第二十五頁，共七十二頁。,由右圖可知，空氣泵產(chǎn)生壓縮空氣，通過鞘流壓力調(diào)節(jié)器加在鞘液上一恒定的壓力，這樣鞘液以勻速運(yùn)動流過流動室，在整個(zhěngg232。 樣品流在鞘流的環(huán)包下形成聚焦，保證每個細(xì)胞通過激光照射區(qū)的時間相等(xiāngděng)，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。,二、流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu),第二十三頁，共七十二頁。tǒng)；細(xì)胞分選系統(tǒng)(x236。tǒng)；光學(xué)系統(tǒng)(x236。,流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)可分為流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)(x236。nɡ)掃描流式細(xì)胞儀,被檢細(xì)胞直徑大于激光光斑(guāngbān)直徑，細(xì)胞通過光束時各部分被依次掃描。,狹縫(xi225。 狹縫掃描流式細(xì)胞儀被檢細(xì)胞直徑大于激光光斑直徑，可計算出細(xì)胞直徑大小、核直徑大小、核漿比例等一系列的形態(tài)學(xué)信息的定量資料。nɡ)又可分為一般流式細(xì)胞儀和狹縫掃描流式細(xì)胞儀。,流式細(xì)胞儀根據(jù)其結(jié)構(gòu)不同(b249。 科研型既有分析功能又有分選功能，可快速將所感興趣的細(xì)胞分選出來。,第二節(jié) 流式細(xì)胞儀的分類和基本(jīběn)結(jié)構(gòu),一、流式細(xì)胞儀的分類 流式細(xì)胞儀根據(jù)功能不同可分為臨床型和科研型。,第十八頁，共七十二頁。ngch233。bāo)分選原理,第十七頁，共七十二頁。,二、流式細(xì)胞(x236。h224。,在壓電晶體上加上頻率為30kHz的信號，使液柱斷裂成一連串均勻的液滴。o)分別被光電倍增管和光電二極管接收，經(jīng)過計算機(jī)儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得細(xì)胞的大小和核酸含量等指標(biāo)。這些信號(x236。nh224。,第十五頁，共七十二頁。,2. 鞘液的作用：流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞細(xì)胞(x236。tǐ)壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細(xì)胞懸液形成樣品流垂直進(jìn)入流式細(xì)胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動。,1. 樣品的進(jìn)入流動室：將
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