20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀概述-wenkub
2024-11-15 05 本頁面
【正文】 了鞘液,鞘液的作用是將樣品流環(huán)包。tǒng)；信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng)(x236。,第二十二頁，共七十二頁。,第二十一頁，共七十二頁。 t243。 臨床型只有分析(fēnxī)功能，沒有分選功能，操作簡便，易學(xué)易掌握。ng)液滴時給含有這類細(xì)胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時，依所帶電荷的符號分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)。bāo)儀細(xì)胞(x236。當(dāng)某類細(xì)胞的特性與要分選的細(xì)胞相同時，流式細(xì)胞儀就會在這類細(xì)胞形成液滴時給含有這類細(xì)胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時，依所帶電荷的符號(fnh224。,3. 信號(x236。,第十四頁，共七十二頁。,第十三頁，共七十二頁。,第十二頁，共七十二頁。,第十一頁，共七十二頁。ng)流式細(xì)胞儀對于處在快速直線流動狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒進行快速的、多參數(shù)的定量分析和分選的技術(shù)稱為流式細(xì)胞技術(shù)。)原理,一、生物學(xué)顆粒(kēl236。,進入90年代，標(biāo)本制備儀和自動進樣器的問世，以及適合臨床應(yīng)用的單克隆抗體的增加，使流式細(xì)胞儀不僅出現(xiàn)(chūxi224。,第七頁，共七十二頁。i)目前各種流式細(xì)胞測量儀的基礎(chǔ)。bāo)測量的基礎(chǔ)。,1965年Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數(shù)同時測量未染色的細(xì)胞(x236。,1934年Moldavan 使懸浮(xu225。,流式細(xì)胞術(shù)的定義:應(yīng)用流式細(xì)胞儀對于處在快速直線流動狀態(tài)(zhu224。),流式細(xì)胞儀的定義(d236。sh249。)與流式細(xì)胞儀,第一頁，共七十二頁。ngy236。ngt224。nfbāo)，給出了細(xì)胞(x236。,第五頁，共七十二頁。,第六頁，共七十二頁。,80年代以來，流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)采集(cǎij237。n)在大專院校和科研單位，它也逐漸進入醫(yī)院的中心實驗室和檢驗科。)分析原理,流式細(xì)胞技術(shù)是在單細(xì)胞水平上，對于處在快速直線流動狀態(tài)中的大量細(xì)胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速的定量分析和分選的技術(shù)，現(xiàn)已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究最先進的分析技術(shù)之一。,第十頁，共七十二頁。,將懸浮分散(fēns224。,鞘液和樣品流在噴嘴附近(f249。,1. 樣品的進入流動室：將懸浮分散的單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異熒光染料染色后，放人樣品管。,2. 鞘液的作用：流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞細(xì)胞(x236。nh224。o)分別被光電倍增管和光電二極管接收，經(jīng)過計算機儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得細(xì)胞的大小和核酸含量等指標(biāo)。h224。bāo)分選原理,第十七頁，共七十二頁。,第十八頁，共七十二頁。 科研型既有分析功能又有分選功能，可快速將所感興趣的細(xì)胞分選出來。nɡ)又可分為一般流式細(xì)胞儀和狹縫掃描流式細(xì)胞儀。,狹縫(xi225。,流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)可分為流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)(x236。tǒng)；細(xì)胞分選系統(tǒng)(x236。 樣品流在鞘流的環(huán)包下形成聚焦，保證每個細(xì)胞通過激光照射區(qū)的時間相等(xiāngděng)，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。,第二十五頁，共七十二頁。o)區(qū)的時間僅為1μs左右，且細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號強弱，與被照射的時間和激發(fā)光的強度有關(guān)，因此細(xì)胞必須達到足夠的光照強度。,第二十七頁，共七十二頁。)的光通過。,第二十九頁，共七十二頁。,第三十頁，共七十二頁。一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，稱為細(xì)胞自發(fā)熒光；另一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記細(xì)胞后，受激發(fā)照射得到的熒光信號，通過對這類熒光信號的檢測和定量分析能了解所研究細(xì)胞的性質(zhì)和數(shù)量。在細(xì)胞膜表面抗原等的熒光檢測時通常使用對數(shù)放大器。 熒光信號的寬度常用來區(qū)分雙連體細(xì)胞。,第三十四頁，共七十二頁。,圖中點A通過透鏡f成像在A’處，而點B通過透鏡f成像在B’處。,第三十六頁，共七十二頁。j236。,2．邏輯電路 為了分選細(xì)胞，需要細(xì)胞在經(jīng)過測量(c232。,3．水滴的充電與偏轉(zhuǎn) 當(dāng)水滴從流束上將要(jiāngy224。,（六）FCM測量數(shù)據(jù)的存貯、顯示與分析 目前FCM數(shù)據(jù)的存貯的方式均采用列表排隊(List Mode)方式。,第四十一頁，共七十二頁。,第四十二頁，共七十二頁。,三、前向角散射光檢測靈敏度 前向角散射光檢測靈敏度是指能夠檢測到的最小顆粒大小(d224。d249。大型機已達到每秒幾萬個細(xì)胞。 分選純度指要分選的目的細(xì)胞占分選出細(xì)胞的百分比。,第四十六頁，共七十二頁。q236。q236。)細(xì)胞間粘連重疊或細(xì)胞碎片過多，都會影響信號的收集及所收集信號的真實性，所以制備單細(xì)胞懸液是進行流式細(xì)胞儀分析最關(guān)鍵的第一步。熒光信號來自于細(xì)胞的自發(fā)熒光或被分析細(xì)胞經(jīng)特異性熒光標(biāo)記染色后通過激光束激發(fā)后所
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