20xx年醫(yī)學專題—流式細胞儀概述-文庫吧
2024-11-15 05:38 本頁面
【正文】 ，使液柱斷裂成一連串均勻的液滴。當某類細胞的特性與要分選的細胞相同時，流式細胞儀就會在這類細胞形成液滴時給含有這類細胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時，依所帶電荷的符號(fh224。o)分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)，從而達到細胞分類收集的目的。,二、流式細胞(x236。bāo)儀細胞(x236。bāo)分選原理,第十七頁，共七十二頁。,當某類細胞的特性與要分選的細胞相同時，流式細胞儀就會在這類細胞形成(x237。ngch233。ng)液滴時給含有這類細胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時，依所帶電荷的符號分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)。,第十八頁，共七十二頁。,第十九頁，共七十二頁。,第二節(jié) 流式細胞儀的分類和基本(jīběn)結(jié)構(gòu),一、流式細胞儀的分類 流式細胞儀根據(jù)功能不同可分為臨床型和科研型。 臨床型只有分析(fēnxī)功能，沒有分選功能，操作簡便，易學易掌握。 科研型既有分析功能又有分選功能，可快速將所感興趣的細胞分選出來。,第二十頁，共七十二頁。,流式細胞儀根據(jù)其結(jié)構(gòu)不同(b249。 t243。nɡ)又可分為一般流式細胞儀和狹縫掃描流式細胞儀。 前者的光斑直徑大于被檢細胞體積，只能提供細胞內(nèi)某種生物化學成分的參數(shù)。 狹縫掃描流式細胞儀被檢細胞直徑大于激光光斑直徑，可計算出細胞直徑大小、核直徑大小、核漿比例等一系列的形態(tài)學信息的定量資料。,第二十一頁，共七十二頁。,狹縫(xi225。 f233。nɡ)掃描流式細胞儀,被檢細胞直徑大于激光光斑(guāngbān)直徑，細胞通過光束時各部分被依次掃描。,第二十二頁，共七十二頁。,流式細胞儀的結(jié)構(gòu)可分為流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)(x236。tǒng)；激光光源及光束成形系統(tǒng)(x236。tǒng)；光學系統(tǒng)(x236。tǒng)；信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng)(x236。tǒng)；細胞分選系統(tǒng)(x236。tǒng)等五個部分。,二、流式細胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu),第二十三頁，共七十二頁。,（一）流動室與液流驅(qū)動系統(tǒng) 流動室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央開一個孔，供細胞單個流過，檢測區(qū)在該孔的中心，流動室內(nèi)充滿了鞘液,鞘液的作用是將樣品流環(huán)包。 樣品流在鞘流的環(huán)包下形成聚焦，保證每個細胞通過激光照射區(qū)的時間相等(xiāngděng)，從而得到準確的細胞熒光信息。,第二十四頁，共七十二頁。,由右圖可知，空氣泵產(chǎn)生壓縮空氣，通過鞘流壓力調(diào)節(jié)器加在鞘液上一恒定的壓力，這樣鞘液以勻速運動流過流動室，在整個(zhěngg232。)系統(tǒng)運行中流速是不變的。,第二十五頁，共七十二頁。,（二）激光光源與光束成形系統(tǒng) 激光是一種相干光源，它能提供單波長、高強度及穩(wěn)定性高的光照(guāngzh224。o)。由于細胞的快速流動，每個細胞經(jīng)過光照(guāngzh224。o)區(qū)的時間僅為1μs左右，且細胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號強弱，與被照射的時間和激發(fā)光的強度有關(guān)，因此細胞必須達到足夠的光照強度。,第二十六頁，共七十二頁。,由于激光焦點處能 量分布為正態(tài)分布（見 圖），中心處能量最高。 因此，當樣本速率選擇 高速時，處在樣本流不 同位置的細胞或顆粒， 受激光照射的能量不一 樣，從而被激發(fā)(jīfā)出的熒 光強度也不相同。,第二十七頁，共七十二頁。,（三）光學系統(tǒng) FCM的光學系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片和小孔組成。 濾光片主要分為： 1.長通濾光片 長通濾光片使特定波長以上的光通過。 2.短通濾光片 特定波長以下(yǐxi224。)的光通過。 3.帶通濾光片 帶通濾光片允許一定波長范圍內(nèi)的光通過,第二十八頁，共七十二頁。,（四）信號檢測與分析(fēnxī) 當細胞攜帶熒光素標記物，通過激光照射區(qū)時，細胞內(nèi)不同物質(zhì)產(chǎn)生不同波長的熒光信號。這些信號以細胞為中心，向空間360度立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號。,第二十九頁，共七十二頁。,1.散射光信號 射光分為前向角散射和側(cè)向角散射，散射光不依賴任何細胞樣品(y224。ngpǐn)的制備技術(shù)(如染色)，稱為細胞的物理參數(shù)（或稱固有參數(shù)）。 （1）前向角散射 前向角散射與被測細胞的大小有關(guān) （2）側(cè)向角散射 側(cè)向散射光可提供細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。,第三十頁，共七十二頁。,2.熒光信號(x236。nh224。o) 當激光光束與細胞正交時，一般會產(chǎn)生兩種熒光信號。一種是細胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，稱為細胞自發(fā)熒光；另一種是經(jīng)過特異熒光素標記細胞后，受激發(fā)照射得到的熒光信號，通過對這類熒光信號的檢測和定量分析能了解所研究細胞的性質(zhì)和數(shù)量。,第三十一頁，共七十二頁。,2.熒光信號
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