20xx年醫(yī)學專題—流式細胞儀概述(已修改)
2024-11-15 05:38 本頁面
【正文】 第十五章 流式細胞技術(shù)(j236。sh249。)與流式細胞儀,第一頁，共七十二頁。,概述(ɡ224。i sh249。),流式細胞儀的定義(d236。ngy236。):流式細胞儀是以激光為光源，集流體力學技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)以及細胞熒光化學技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技儀器。,第二頁，共七十二頁。,流式細胞術(shù)的定義:應用流式細胞儀對于處在快速直線流動狀態(tài)(zhu224。ngt224。i)中的細胞或生物顆粒進行快速的、多參數(shù)的定量分析和分選的技術(shù)稱為流式細胞術(shù)。,第三頁，共七十二頁。,1934年Moldavan 使懸浮(xu225。nf)的血紅細胞從一個毛細玻璃管中流過，每個通過的細胞可被一個光電裝置記錄下來，這可謂流式細胞儀的最初模型。,第四頁，共七十二頁。,1965年Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數(shù)同時測量未染色的細胞(x236。bāo)，給出了細胞(x236。bāo)中核酸的含量和細胞(x236。bāo)大小，奠定了多參數(shù)流式細胞(x236。bāo)測量的基礎。,第五頁，共七十二頁。,1967年Van Dilla 和Los Alamos采用了CroslandTaylor設計的層流流動室和氬離子激光器開發(fā)出了液流束、照明光軸，檢測系統(tǒng)三者互相垂直的流式細胞儀，成為(ch233。ngw233。i)目前各種流式細胞測量儀的基礎。,第六頁，共七十二頁。,1969年Fulwyler利用Sweet的靜電墨水噴射液滴偏轉(zhuǎn)(piānzhuǎn)技術(shù)，建立了流式細胞分選術(shù)。Ehrlich和Wheeless利用飛點掃描技術(shù)和縫掃描技術(shù)使零分辨率的流式細胞儀變成了低分辨率的流式細胞儀。,第七頁，共七十二頁。,80年代以來，流式細胞儀的數(shù)據(jù)采集(cǎij237。)、存儲、顯示、分析日趨完善，隨著樣品制備方法的增多，新的熒光染料和細胞標記物的出現(xiàn)，流式細胞儀的應用范圍逐漸擴大。,第八頁，共七十二頁。,進入90年代，標本制備儀和自動進樣器的問世，以及適合臨床應用的單克隆抗體的增加，使流式細胞儀不僅出現(xiàn)(chūxi224。n)在大專院校和科研單位，它也逐漸進入醫(yī)院的中心實驗室和檢驗科。,第九頁，共七十二頁。,第一節(jié) 流式細胞儀的工作(gōngzu242。)原理,一、生物學顆粒(kēl236。)分析原理,流式細胞技術(shù)是在單細胞水平上，對于處在快速直線流動狀態(tài)中的大量細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速的定量分析和分選的技術(shù)，現(xiàn)已成為現(xiàn)代醫(yī)學研究最先進的分析技術(shù)之一。應用(y236。ngy242。ng)流式細胞儀對于處在快速直線流動狀態(tài)中的細胞或生物顆粒進行快速的、多參數(shù)的定量分析和分選的技術(shù)稱為流式細胞技術(shù)。,第十頁，共七十二頁。,生物學顆粒包括大的免疫復合物、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、病毒顆粒、脂質(zhì)體、細胞器、細菌(x236。jūn)、霉菌、染色體、真核細胞、雜交細胞、聚集細胞等，所檢測的生物顆粒的理化性質(zhì)包括細胞大小、細胞形態(tài)、胞漿顆?；潭?、DNA含量、總蛋白質(zhì)含量、細胞膜完整性和酶活性等。,第十一頁，共七十二頁。,將懸浮分散(fēns224。n)的單細胞懸液，經(jīng)特異熒光染料染色后，放人樣品管。在氣體壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細胞懸液形成樣品流垂直進入流式細胞儀的流動室，染色的細胞受激光照射后發(fā)出熒光，同時產(chǎn)生光散射。,第十二頁，共七十二頁。,鞘液和樣品流在噴嘴附近(f249。j236。n)組成一個圓柱流束，與水平方向的激光束垂直相交，染色的細胞受激光照射后發(fā)出熒光，這些信號分別被光電倍增管熒光檢測器和光電二極管散射光檢測器接收，經(jīng)過計算機儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得到細胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性質(zhì)等物理和生化指標。,第十三頁，共七十二頁。,1. 樣品的進入流動室：將懸浮分散的單細胞懸液，經(jīng)特異熒光染料染色后，放人樣品管。在氣體(q236。tǐ)壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細胞懸液形成樣品流垂直進入流式細胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動。,第十四頁，共七十二頁。,2. 鞘液的作用：流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞細胞(x236。bāo)懸液的鞘液流，鞘液和樣品流在噴嘴附近組成一個圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點稱為測量區(qū)。,第十五頁，共七十二頁。,3. 信號(x236。nh224。o)的產(chǎn)生與接收：染色的細胞在測量區(qū)受激光照射后發(fā)出熒光，同時產(chǎn)生光散射。這些信號(x236。nh224。o)分別被光電倍增管和光電二極管接收，經(jīng)過計算機儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得細胞的大小和核酸含量等指標。,第十六頁，共七十二頁。,在壓電晶體上加上頻率為30kHz的信號
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