流式細(xì)胞術(shù)的參考樣品(已修改)
2025-05-12 01:23 本頁面
【正文】 流式細(xì)胞術(shù)的參考樣品 河北省腫瘤研究所 一 參考標(biāo)準(zhǔn)樣品在 FCM使用的意義 ? 參考標(biāo)準(zhǔn)樣品在 FCM中使用，為了監(jiān)測儀器的液流 電子和各個光學(xué)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，校正和調(diào)試儀器的 CV值，最大限度的提高儀器的分辨能力． 。 FCM的測量是相對的，而不是絕對的，所以參考細(xì)胞有助于單個樣品或一組樣品的測量參數(shù)的解釋。 定性，以使所測參數(shù)具有可靠性和可比性。 4 參考細(xì)胞可被用于監(jiān)測染色過程。 5 能夠用于校驗 FCM分選術(shù)的回收和純度。 參考細(xì)胞的主要作用如下 : 二、 標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞樣品具備的特性 ? 一個標(biāo)準(zhǔn)樣品，應(yīng)具有較恒定的體積大小 ? 具有較恒定熒光發(fā)射量子 ? 細(xì)胞的形狀較一致 ? 在液流中的流動取向較一致 ? 在懸液中可保持高度的單分散狀態(tài)，放置較長時間不會聚集、不改變其形狀、體積大小及其光學(xué)特性 1. 外標(biāo)法 ? 標(biāo)準(zhǔn)樣品在流式分析實驗樣品前或后，上儀器測量，以校正儀器在工作條件下穩(wěn)定性。 ? 缺點 由于參考樣品與實驗樣品不同步染色，以及在實驗過程中儀器條件的漂移，可能引起定量檢測的誤差，因此，近年在流式細(xì)胞定量檢測中已被摒棄。 參考標(biāo)準(zhǔn)的使用方法 2. 內(nèi)標(biāo)法 ? 內(nèi)標(biāo)法是將標(biāo)準(zhǔn)樣品與實驗樣品按一定的細(xì)胞數(shù)混懸在一起進(jìn)行同步染色 ,這種方法可以避免外標(biāo)法引入的誤差 ,可以避免因染色、光源強(qiáng)度的瞬時波動，以及細(xì)胞流速的變化和流束與激光束焦點的漂移造成的實驗結(jié)果偏差。 ? 內(nèi)標(biāo)法可保證標(biāo)準(zhǔn)樣品與實驗樣品在同樣條件下制備和測量，可使測量誤差降到最小限度。內(nèi)標(biāo)法在流式細(xì)胞測量術(shù)中已廣泛應(yīng)用。 三、參考樣本的制備方法 ㈠非生物標(biāo)準(zhǔn)樣本 塑料微球已廣泛應(yīng)用于參考標(biāo)準(zhǔn)樣品，這些塑料小球可分為兩種： 1. 無熒光塑料小球 ? 可用于散射光的校正，此種統(tǒng)一大小無熒光微球，對于校正儀器光散射是非常有用的。最好采用 10μm 大?。ㄅc正常人淋巴細(xì)胞大小相似），通過微球大小的測量，可以對實驗樣品細(xì)胞的面積，直徑，橫截面積和體積作出相對大小的判斷。 2. 標(biāo)記有熒光染料的塑料微球 ? 標(biāo)記熒光染料多選用 PI、 EB、 FITC、 AO等，熒光染色的塑料微球可用于調(diào)整和監(jiān)測光散射和熒光信號的檢測。對不同熒光染色細(xì)胞所結(jié)合的熒光的數(shù)目和細(xì)胞體積的大小進(jìn)行較準(zhǔn)確的計算。 ? 流式細(xì)胞儀對于微球分辨率的大小，取決于微球大小是否一致，分辨率的大小一般用變異系數(shù) (Coeffience of Variation CV)來表示，目前有的生產(chǎn)廠家出售的商品微球已標(biāo)明 cv值。 美國生產(chǎn)微球有如下公司的產(chǎn)品： Diagnostics Inc 400 Valley Road Warrmgton PA 18979 μm Dickinso
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