20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀原理和一般用法-文庫(kù)吧資料
2024-11-15 05:37本頁(yè)面
【正文】 性關(guān)系，細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測(cè)量一般選用線性放大測(cè)量。nh224。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)(chāogu242。)，也不在圖形中顯示。)的最小或最大信號(hào)強(qiáng)度，低于閾值下限或高于閾值上限的信號(hào)將不被光電倍增管識(shí)別(sh237。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),閾 值,閾值用來(lái)定義能夠被光電倍增管識(shí)別(sh237。o)的寬度和面積通常用來(lái)辨別雙粘體細(xì)胞,第二十八頁(yè)，共五十四頁(yè)。n fā)經(jīng)驗(yàn),脈沖信號(hào)(x236。s),電壓,脈沖面積(A),脈沖高度 (H),脈沖寬度(W),40,0,第二十七頁(yè)，共五十四頁(yè)。)、寬度和面積,時(shí)間(sh237。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)(chāogu242。)產(chǎn)生電壓脈沖信號(hào),電壓(di224。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),光電倍增管如何(r,第二十五頁(yè)，共五十四頁(yè)。一種是細(xì)胞自身(z236。 (2)側(cè)向角散射：代表細(xì)胞內(nèi)容物多少（或稱為密度），側(cè)向角散射是指與激光束正交900方向的散射光信號(hào)，側(cè)向散射光對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。 (1)前向角散射：代表細(xì)胞體積大小，前向角散射與被測(cè)細(xì)胞的大小有關(guān)，確切說(shuō)與細(xì)胞直徑的平方密切相關(guān)，通常在FCM應(yīng)用中，選取FSC作閾值，來(lái)排除樣品中的各種(ɡ232。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)(chāogu242。o)檢測(cè)與分析,當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過(guò)激光照射區(qū)時(shí)，受激光激發(fā)，產(chǎn)生代表(d224。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),信號(hào)(x236。,第二十三頁(yè)，共五十四頁(yè)。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),帶通濾片,帶通濾片可允許相當(dāng)窄的一波長(zhǎng)范圍內(nèi)光通過(guò)，一般(yībān)濾片上有兩個(gè)數(shù)，一個(gè)為允許通過(guò)波長(zhǎng)的中心值，另一為允許通過(guò)光波段的范圍。,第二十二頁(yè)，共五十四頁(yè)。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),短通濾片,與長(zhǎng)通濾片相反，特定波長(zhǎng)以下(yǐxi224。,第二十一頁(yè)，共五十四頁(yè)。ng)波長(zhǎng)以下的不通過(guò)。ng)波長(zhǎng)以上的光通過(guò)，特定(t232。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),長(zhǎng)通濾片,長(zhǎng)通濾片使特定(t232。n)是濾光片，主要分為三類：,長(zhǎng)通濾片 LP 短通濾片 SP 帶通濾片 BP,第二十頁(yè)，共五十四頁(yè)。 在流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)中主要光學(xué)原件(yu225。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)41年的研發(fā)(y225。為保證樣品中細(xì)胞是一個(gè)一個(gè)分別受到光照并且受照強(qiáng)度十分一致,須將樣本流與激光束正交且相交于激光能量分布峰值處,臺(tái)式機(jī)FCM的光路調(diào)節(jié)對(duì)用戶是封閉的，即安裝時(shí)由工程師調(diào)試完畢后,無(wú)需用戶作任何調(diào)節(jié), 所以用戶操作十分方便。 激光光束在到達(dá)流動(dòng)室前，先經(jīng)過(guò)透鏡，將其聚焦，形成幾何尺寸約即短軸稍大于細(xì)胞的直徑的光斑。n fā)經(jīng)驗(yàn),激 光,提供單波長(zhǎng)、高強(qiáng)度及穩(wěn)定性高的光照，是細(xì)胞微弱熒光快速分析的理想光源(guāngyu225。)形成系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng)（濾光片組） 信號(hào)檢測(cè)與存儲(chǔ)系統(tǒng) 顯示、分析系統(tǒng),第十八頁(yè)，共五十四頁(yè)。uz224。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)(chāogu242。n fā)經(jīng)驗(yàn),激光(jīguāng)， 如： 488nm,FL2 PE,SSC,FSC,液路,電子元件部分(b249。,第十六頁(yè)，共五十四頁(yè)。 流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液,鞘液的作用是將樣品流環(huán)包。,流動(dòng)室(Flow Cuvette或 Flow Cell)是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。光電倍增管將收集的光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)再傳輸至計(jì)算機(jī)，計(jì)算機(jī)通過(guò)(tōnggu242。)測(cè)量區(qū)的細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生熒光。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為測(cè)量區(qū)。nlǐ),待測(cè)細(xì)胞被制備成單個(gè)細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進(jìn)入流動(dòng)室。n fā)經(jīng)驗(yàn),流式細(xì)胞儀的原理(yu225。,第十五頁(yè)，共五十四頁(yè)。上述特征可以是細(xì)胞的大小、活性，核酸的數(shù)量、酶、抗原等等。)在液體中的細(xì)胞一個(gè)個(gè)地依次通過(guò)測(cè)量區(qū)，當(dāng)每個(gè)細(xì)胞通過(guò)測(cè)量區(qū)并被激發(fā)光照射時(shí)產(chǎn)生光信號(hào)，然后被光電倍增管（PMT）轉(zhuǎn)化成電信號(hào)，這些信號(hào)可以代表熒光、普通光散射、光吸收或細(xì)胞的阻抗等。nlǐ)概述,流式細(xì)胞儀（Flow Cytometer 簡(jiǎn)稱FCM）是一種自動(dòng)分析細(xì)胞的高端技術(shù)設(shè)備，其原理是懸浮(xu225。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)41年的研發(fā)(y225。nb225。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),常用熒光(y237。n)熒光染料列表,第十三頁(yè)，共五十四頁(yè)。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),常見(jiàn)(ch225。n)熒光染料列表,第十二頁(yè)，共五十四頁(yè)。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),常見(jiàn)(ch225。白細(xì)胞自發(fā)熒光強(qiáng)度為650~1150MESF，血小板及其他顆粒自發(fā)熒光更低 流式細(xì)胞儀精度：分析(fēnxī)白細(xì)胞要求精度在600MESF以內(nèi)，分析其他細(xì)胞或顆粒需要更高的精度：200MESF以內(nèi),第十一頁(yè)，共五十四頁(yè)。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),與流式細(xì)胞儀相關(guān)的熒光(y237。 詳細(xì)信息，見(jiàn)細(xì)胞探針公司網(wǎng)站： www.molecularProbes.com,第十頁(yè)，共五十四頁(yè)。ny242。n w232。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(guò)(chāogu242。u)中的AT堿基對(duì)結(jié)合，從而使細(xì)胞在激發(fā)光的照射下發(fā)特定波長(zhǎng)的光，通過(guò)判斷發(fā)射光的強(qiáng)弱來(lái)推算AT堿基對(duì)的多少，從而得知DNA的倍性關(guān)系。)性染料,如DAPI、赫斯特、PI等，直接與細(xì)胞內(nèi)的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)(ji233。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),嵌入(qi2
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