【正文】 儀器還可以根據(jù)所規(guī)定的參量把指定的細(xì)胞亞群從整個(gè)群體中分選出來。通過(tōnggu242。鞘液流是一種穩(wěn)定流動(dòng)的液體，操作人員無法隨意改變其流動(dòng)的速度,樣品流在鞘流的環(huán)包下形成流體動(dòng)力學(xué)聚焦，使樣品流不會脫離液流的軸線方向，結(jié)合樣品噴嘴的特殊結(jié)構(gòu)，從而保證每個(gè)細(xì)胞通過激光照射區(qū)的時(shí)間相等，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞信息（散射光和熒光）。o),流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng) 激光光源及光束(guāngsh249。,第十九頁，共五十四頁。d236。)的光通過，特定波長以上的光吸收或返回。nh224。,2.熒光信號：當(dāng)激光光束與細(xì)胞正交時(shí)，一般會產(chǎn)生兩種熒光信號。nyā)脈沖,第二十六頁，共五十四頁。nh224。,第二十九頁，共五十四頁。如果用線性放大將無法在一張圖上清晰地將細(xì)胞陽性群、陰性群同時(shí)顯示出來。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。,第三十二頁，共五十四頁。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。,FL1FITC,第三十六頁，共五十四頁。,第三十七頁，共五十四頁。 對Region使用顏色可更好地描述該范圍或區(qū)域。)噪音信號并可以最終被存儲在硬盤上。,假設(shè)樣品為V，數(shù)量為n，則：,算術(shù)定義的平均值=（V1+V2+V3…+Vn)/n 幾何定義的平均值=,第四十頁，共五十四頁。)放大 算術(shù)平均值 算術(shù)平均值 幾何平均值,（4*64+6*128+2*192+1*256）/13 （4*10+6*100+2*1000+1*10000）/13 =128 =972.3 =100,第四十一頁，共五十四頁。ng) R4/R1=41% R3/R1=24.21% R2/R1=34.3% 做補(bǔ)償后 R4/R1=41.04% R3/R1=24.75% R2/R1=34.22%,補(bǔ)償，我們通常按照細(xì)胞聚集區(qū)的中心點(diǎn)來計(jì)算，但實(shí)際的原理是按細(xì)胞團(tuán)的位置來定的，也就是純粹按照計(jì)算得出的，比如上圖的R4細(xì)胞團(tuán)，它在X軸上的位置是0.3到1之間，在Y軸的位置是2到6之間，這團(tuán)細(xì)胞平均值在FL1,FL2中的分部坐標(biāo)為0.68,3.9。),FL1染色,FL2未染色,FL1FITC CD3,補(bǔ)償后,平均值 = ~2.0,FL1染色,FL2未染色,第四十四頁，共五十四頁。biāo)細(xì)胞群體,尋找細(xì)胞群：如標(biāo)本為外周血白細(xì)胞，在FSC/SSC散點(diǎn)圖中信號最強(qiáng)的為粒細(xì)胞，依次為單核、淋巴、紅細(xì)胞碎片。使用空白標(biāo)本作為陰性對照，或設(shè)立陽性對照。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)的意義 熟悉設(shè)門操作 開擴(kuò)思路，靈活設(shè)計(jì)各種檢測方案,第五十一頁，共五十四頁。ng)總結(jié),Partec Excellence in Flow Cytometry。使用空白標(biāo)本作為陰性對照，或設(shè)立陽性對照。)的光信號在同一橫坐標(biāo)點(diǎn)（通道）內(nèi)向Y軸方向累計(jì)。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),謝謝(xi232。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。)指標(biāo),檢測前要清楚地知道：除陽性百分比指標(biāo)外，還有熒光強(qiáng)度指標(biāo)。 如標(biāo)本中無明顯特征細(xì)胞群，可使用已建淋巴細(xì)胞檢測方案根據(jù)相對位置定位目標(biāo)細(xì)胞群,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十七頁，共五十四頁。n fā)經(jīng)驗(yàn),上機(jī)檢測(jiǎn c232。,第四十三頁，共五十四頁。)與補(bǔ)償？,當(dāng)一種激光束激發(fā)(jīfā)兩種熒光染料而發(fā)射出兩種不同波長的熒光時(shí)，這兩種發(fā)射光會出現(xiàn)光譜部分重疊的現(xiàn)象，從而造成檢測的準(zhǔn)確性下降，必須使用適當(dāng)?shù)臑V片或進(jìn)行電子補(bǔ)償來盡量減少光重疊對實(shí)驗(yàn)的影響。)取平均值？,線性放大 對數(shù)(du236。n me)是Mean？,1.算術(shù)(su224。n me)是Gate？,1.使用布爾數(shù)學(xué)體系的操作方法（邏輯學(xué)）定義一個(gè)或?qū)⒍鄠€(gè)Region進(jìn)行聯(lián)合叫做Gate。x237。u c232。n fā)經(jīng)驗(yàn),直方圖 （用于單參數(shù)(cānsh249。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。 文本信息：描述樣品信息和狀態(tài)(zhu224。n fā)經(jīng)驗(yàn),流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)格式,FCS：幀校驗(yàn)序列（FCS）字段，通常為16位（2個(gè)字節(jié)長），也可以為4個(gè)字節(jié)。o)的線性測量和對數(shù)測量,線性放大： 即放大器的輸出與輸入(shūr249。bi233。jiān) (181。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),1.散射光信號：散射光分為前向角散射( FSC ，F(xiàn)orward Scatter ) 和側(cè)向角散射(SSC，Side Scatter)，散射光不依賴任何細(xì)胞樣品的制備技術(shù)(如染色)，因此被稱為細(xì)胞的物理參數(shù)（或稱固有參數(shù)）。如BP 500 / 50表示其允許通過波長范圍為475nm~525nm。如LP500濾片，將允許500 nm以上的光通過，而500 nm以下的光吸收或返回。n ji224。n)，這是因?yàn)橛捎诩?xì)胞的快速流動(dòng)，每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過光照區(qū)的時(shí)間僅為１微秒左右，每個(gè)細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號強(qiáng)弱，與被照射的時(shí)間和激發(fā)光的強(qiáng)度有關(guān)，因此要求細(xì)胞必須達(dá)到足夠的光照強(qiáng)度。 fen),計(jì)算機(jī),FL3 PerCP, Cy5,FL1 FITC,光學(xué)接收器,第十七頁，共五十四頁。)相應(yīng)的軟件將電信號模擬成圖像。nlǐ)工作原理(yu225。nf,