20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀原理和一般用法(編輯修改稿)
2024-11-15 05:37 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 節(jié), 所以用戶操作十分方便。,第十九頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經(jīng)驗(yàn),光學(xué)系統(tǒng),流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片、小孔組成，它們分別將不同波長的熒光信號(hào)送入到不同的電子探測器。 在流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)中主要光學(xué)原件(yu225。n ji224。n)是濾光片，主要分為三類：,長通濾片 LP 短通濾片 SP 帶通濾片 BP,第二十頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),長通濾片,長通濾片使特定(t232。d236。ng)波長以上的光通過，特定(t232。d236。ng)波長以下的不通過。如LP500濾片，將允許500 nm以上的光通過，而500 nm以下的光吸收或返回。,第二十一頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),短通濾片,與長通濾片相反，特定波長以下(yǐxi224。)的光通過，特定波長以上的光吸收或返回。,第二十二頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),帶通濾片,帶通濾片可允許相當(dāng)窄的一波長范圍內(nèi)光通過，一般(yībān)濾片上有兩個(gè)數(shù)，一個(gè)為允許通過波長的中心值，另一為允許通過光波段的范圍。如BP 500 / 50表示其允許通過波長范圍為475nm~525nm。,第二十三頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),信號(hào)(x236。nh224。o)檢測與分析,當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過激光照射區(qū)時(shí)，受激光激發(fā)，產(chǎn)生代表(d224。ibiǎo)細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號(hào)，這些信號(hào)以細(xì)胞為中心，向空間360度立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào), 下圖是以激發(fā)光光源波長488nm為例的示意圖：,第二十四頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),1.散射光信號(hào)：散射光分為前向角散射( FSC ，F(xiàn)orward Scatter ) 和側(cè)向角散射(SSC，Side Scatter)，散射光不依賴任何細(xì)胞樣品的制備技術(shù)(如染色)，因此被稱為細(xì)胞的物理參數(shù)（或稱固有參數(shù)）。 (1)前向角散射：代表細(xì)胞體積大小，前向角散射與被測細(xì)胞的大小有關(guān)，確切說與細(xì)胞直徑的平方密切相關(guān)，通常在FCM應(yīng)用中，選取FSC作閾值，來排除樣品中的各種(ɡ232。 zhǒnɡ)碎片及鞘液中的小顆粒，以避免對被測細(xì)胞的干擾。 (2)側(cè)向角散射：代表細(xì)胞內(nèi)容物多少（或稱為密度），側(cè)向角散射是指與激光束正交900方向的散射光信號(hào)，側(cè)向散射光對細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。,2.熒光信號(hào)：當(dāng)激光光束與細(xì)胞正交時(shí)，一般會(huì)產(chǎn)生兩種熒光信號(hào)。一種是細(xì)胞自身(z236。shēn)在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號(hào)，稱為細(xì)胞自發(fā)熒光；另一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記細(xì)胞后，受激發(fā)照射得到的熒光信號(hào)，通過對這類熒光信號(hào)的檢測和定量分析就能了解所研究細(xì)胞參數(shù)的存在與定量。,第二十五頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),光電倍增管如何(rh233。)產(chǎn)生電壓脈沖信號(hào),電壓(di224。nyā)脈沖,第二十六頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),高度(gāod249。)、寬度和面積,時(shí)間(sh237。jiān) (181。s),電壓,脈沖面積(A),脈沖高度 (H),脈沖寬度(W),40,0,第二十七頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經(jīng)驗(yàn),脈沖信號(hào)(x236。nh224。o)的寬度和面積通常用來辨別雙粘體細(xì)胞,第二十八頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),閾 值,,閾值用來定義能夠被光電倍增管識(shí)別(sh237。bi233。)的最小或最大信號(hào)強(qiáng)度，低于閾值下限或高于閾值上限的信號(hào)將不被光電倍增管識(shí)別(sh237。bi233。)，也不在圖形中顯示。,第二十九頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),熒光信號(hào)(x236。nh224。o)的線性測量和對數(shù)測量,線性放大： 即放大器的輸出與輸入(shūr249。)是線性關(guān)系，細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測量一般選用線性放大測量。 對數(shù)放大： 即放大器的輸出成10倍關(guān)系，如果原來輸出是1，當(dāng)輸入增大到原來10倍時(shí)，輸出為2；當(dāng)輸入增大到原來100倍時(shí)輸出是3等等。 在免疫學(xué)樣品中，細(xì)胞膜表面抗原的分布有時(shí)要差幾十倍甚至幾萬倍。如果用線性放大將無法在一張圖上清晰地將細(xì)胞陽性群、陰性群同時(shí)顯示出來。 。,第三十頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經(jīng)驗(yàn),流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)格式,FCS：幀校驗(yàn)序列（FCS）字段，通常為1
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1