流式細胞術(shù)的原理ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-13 17:47 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 注的是吸收波峰，也就是最大吸收波長：ExMax 發(fā)射光譜（ Emission， Em）： 是指熒光素發(fā)射的一定波長范圍內(nèi)的熒光。所有熒光都是寬譜發(fā)射。 一般標注的是發(fā)射波峰，即最大發(fā)射波長： EmMax FITC的激發(fā)與發(fā)射光譜 常用染料 FITC可被 488nm激光激發(fā)， EmMax： 525nm，可以配用 530/30接收通道 488nm 525nm PI的激發(fā)與發(fā)射光譜 常用染料 PI同樣可被 488nm激光激發(fā)， EmMax： 625nm，所以配用不同的 585/42接收通道 488nm 625nm APC的激發(fā)與發(fā)射光譜 常用染料 APC可被 633nm激光激發(fā)， EmMax： 660nm，可以配用 660/20接收通道 633nm 660nm 熒光染料的選擇 儀器配置： 激光器種類； 光信號接收通道； 減少發(fā)射光光譜重疊 補償 —— 熒光染料寬譜發(fā)射的特征產(chǎn)生補償問題 。 — PE滲漏到 FITC通道的信號 FL1x%FL2 — FITC滲漏到 PE通道的信號 FL2x%FL1 先電壓，后補償 雙色染色的實驗中 先使用陰性管調(diào)電壓 陰性對照（ 1）：細胞加上 IgG1 FITC,IgG1 PE 然后用單染管調(diào)補償 單染管（ 2）：細胞 +抗體 A FITC or 抗體 B PE 調(diào) 電壓 尋找目標細胞群 。 多色實驗中，分出陰陽性細胞群分界線 調(diào) 閾值 減少背景信號 調(diào) 補償 減去干擾信號 調(diào)節(jié)電壓、閾值、補償 調(diào)整熒光接收器電壓 電壓改變對數(shù)據(jù)顯示的影響 數(shù)據(jù)存儲 List Mode列表模式：每個細胞的參數(shù)依次按順序排列存儲
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