流式細胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-05-27 01:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 得到目的細胞的實際得率。與分選速度成反比。 （二）分選的技術(shù)要求 ? 參數(shù)： FS,SS,FL ? 數(shù)據(jù)顯示方式 （單參數(shù)直方圖 、雙參數(shù)散點圖 、二維等高圖 、假三維等高圖 、三參數(shù)散點圖 ） ? 設(shè)門分析技術(shù) 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 FS：反映顆粒的大小 SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度 FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少 一、 參數(shù) ? 單參數(shù)直方圖 ? 雙參數(shù)直方圖 :點圖 二維等高圖 假三維等高圖 ? 三參數(shù)直方圖 ? 多參數(shù)分析 直分析方圖 設(shè)門分析 :REGION和 GATE設(shè)置 二、數(shù)據(jù)顯示方式 由一維參數(shù) (散射光或熒光 )與顆粒計數(shù)(COUNT)構(gòu)成，反映同樣散射光或熒光強度的顆粒數(shù)量的多少。 （一）單參數(shù)直方圖 單參數(shù)直方圖 細胞相對數(shù)量 信道(channel ) ? 雙參數(shù)直方圖：縱軸和橫軸分別代表被測量細胞的兩個測量參數(shù)，根據(jù)這兩個參數(shù)就可以確定細胞在圖上的表達位置。 ? 雙參數(shù)信號 通常采用對數(shù)信號，最常用的是點密圖，在圖中，每個點代表一個細胞，點圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強度的顆粒數(shù)量的多少。 （二）雙參數(shù)直方圖 綠色熒光強度 紅色熒光強度 雙參數(shù)直方圖點圖 2. 二維等高圖 ? 由類似地圖上的等高線組成，其本質(zhì)也是雙參數(shù)直方圖。 ? 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細胞相對或絕對數(shù)，即 “ 等高 ” 。 ? 曲線層次越高 (越里面的線 ) 所代表的細胞數(shù)愈多。 ? 等高線越密集則表示細胞數(shù)變化率越大。 二維等高圖 3. 假三維等高圖 （三）三參數(shù)直方圖 多參數(shù)分析：當細胞標記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號和散射光信號可根據(jù)需要進行組合分析。 （四）流式細胞儀的多參數(shù)分析 Gate設(shè)置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細胞群分布選定其中想要分析的特定細胞群，并要求該樣本所有其他參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細胞的分布情況。 根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形門、圓形門、多邊形門、任意形狀門和十字門。 三、設(shè)門分析技術(shù) A 淋巴細胞 B 單核細胞 C 中性粒細胞 A、 B、 C均為任意門 線性門 ? Region設(shè)置 : 區(qū)閾（ region, R）與門 (gate, G ) 是兩個相關(guān)的概念，區(qū)閾可與門對應(yīng)，但是也可以包含于門。 D1 CD4+/CD3 D2 CD4+/CD3+ D3 CD4 /CD3 D4 CD4 /CD3+ 如十字門分析時，起就可以由四個區(qū)域構(gòu)成，即G=D1+D2+D3+D4。 ? 樣本制備 ? 標記染色 ? 液相芯片技術(shù) ? 質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術(shù)要求 ?外周血淋巴細胞樣品的制備 分離單個核細胞 ?培養(yǎng)細胞的樣品制備 蛋白酶消化 機械吹打 使貼壁細胞脫落 洗滌 尼龍網(wǎng)過濾 單細胞懸液 一、免疫檢測樣品制備 ?新鮮實體組織單細胞懸液的制備 ? 機械法 ? 酶處理法 ? 化學(xué)試劑處理法 ? 表面活性劑處理法
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