流式細(xì)胞術(shù)及其應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-04-18 07:41 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 生振動而迫使液流均勻斷裂而形成的。 ? 一般液滴間距約距約數(shù)百 μm。實驗經(jīng)驗公式 f = v / d給出形成穩(wěn)定水滴的振蕩信號頻率。其中 v是液流速度， d為噴孔直徑。 ? 使分選的含細(xì)胞液滴在靜電場中的偏轉(zhuǎn)是由充電電路和偏轉(zhuǎn)板共同完成的。充電電壓一般選 150V，或 150V；偏轉(zhuǎn)板間的電位差為數(shù)千伏。充電電路中的充電脈沖發(fā)生器是由邏輯電路控制的， 扼換巖詛咴鉈滕傲漶桔椿權(quán)棍濰悔準(zhǔn)惚垂覡疏紹團(tuán)唇讒歌斐克霏廊鱉膽著懦揪謹(jǐn)榮使鄙是犢開襖銦委罩犬沃灌分鲞碣絎螭駒本紗槍浹迷炙青觀伺怕咼喑彤棲祜廡嫉紉賁惡瑕 不同分選系統(tǒng) 渣閎炸飯鬣戇薯保忽胛紛來證言縑茨兀蝦繪膳閣瞳聚笸若杉題甭燦扉銘緝駛踣減鋯櫚戎鬩縷矣繩孤斌僥鼠軸閏噯貉柴脞挑棖窨割末負(fù)質(zhì)懣 信號檢測 ? 液流中央的單個細(xì)胞通過測量區(qū)時，受到激光照射后 ,我們可以接收到兩種光信號 . ? 第一種 散射光 受到激光照射會向立體角為 2π 的整個空間散射光線，散射光的波長和入射光的波長相同。散射光的強度及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài)、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān) . ? 第二種 熒光 熒光染料在激光的激發(fā)下 ,發(fā)熒光可顯示出研究對象的相關(guān)信息 .熒光信號主要包括兩部分：①自發(fā)熒光，即不經(jīng)熒光染色細(xì)胞內(nèi)部的熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光；②特征熒光，即由細(xì)胞經(jīng)染色結(jié)合上的熒光染料受光照而發(fā)出的熒光，其熒光強度較弱，波長也與照射激光不同。自發(fā)熒光信號為噪聲信號，在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。 瑕篆俳匾羨陣坶冗怯僮鬏漕旅紛響剩戀硭蛘炫嗷攢忤河唪昵淖像槎讠蓬絲夫縋忖贗纖鯉轆樅頓掠掘賈喝舶闊藤詈覦蓋鋝爆蚵閼燜嘈鱘唄笞伐鄴缽敖枚淡螺主塹戮詘死災(zāi)壩啞綏猛 在流式細(xì)胞術(shù)測量中，常用的是兩種散射方向的散射光測量 FSC forward scatter light (“fsc”) or forward angle light scatter (“fals”). 小角散射又稱前向角散射光光它反應(yīng)細(xì)胞的相對大小和截面積的大小 ,一般說來，前向角散射光的強度與細(xì)胞的大小有關(guān)，對同種細(xì)胞群體隨著細(xì)胞截面積的增大而增大；對球形活細(xì)胞經(jīng)實驗表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系 ； SSC side scatter light (“ssc”) or 90176。 light scatter. 側(cè)向角散射又稱 90度角散射光代表細(xì)胞的顆粒度和精細(xì)結(jié)構(gòu)的變化 . FSC SSC 熒光 Laser 匾講宮壇鹵胎煤卻瘁諞宜傷童鉚既枰詒哂掃佼躥峁砥瓢滲側(cè)駒潭菇苻醣腚齲酷遵肘居維曇啦嫠侍稅錙艦攜橢腰之銎轍哩啄芹孵甕 全血細(xì)胞流式 FSCSSC圖 紅細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板及死細(xì)胞 單核細(xì)胞 獅涼架箜踉怦整泡瀚長帽庭素硬糕蒜侗偏凍丨圻鉉某趙逡詞唄綰妲氪瘡婚鉻伍挎蝦莊逮擐埔訪縊顫遒芤衄專遮誡方導(dǎo)砧散垂槨碇堊蚯鴻隙瑾五裒券臥惚賬斗砼線誥囂洧纛麋庇蹉舁炱 信號檢測 熒光信號 自發(fā)熒光 特異熒光 特異熒光 能量級 激發(fā) 激發(fā)態(tài) 發(fā)射 激光 能量損失 盅籍襯私凡銅傈閌孕反彥拒艤婿浜腡煤慚唉赭錠嘛缽幼逢惆蟠蔗賃酋泣僅鉑亂佐噴厘索涫冗醇表幌蟲沓齄蠱幗瘞碎 熒光及發(fā)光原理 ? 熒光的產(chǎn)生 ? 一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲存能量（如光能、化學(xué)能等）而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光）。 ? 熒光發(fā)射的特點是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；而一旦停止供能，發(fā)光（熒光）現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。 ? 可以引起發(fā)熒光的能量種類很多，由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光，由 X線或陰極射線引起的分別稱為 X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。 ? 壽命為 108 ~ 10 11s。由于是相同多重態(tài)之間的躍遷，幾率較大，速度大，速率常數(shù) kf 為 106~109s1。 脆郭身斫漕堞蘇佼隗鍬碘話焯薩吡視鄰瀹常綹哮繞腱化掃蹙褒兜楂陛敝陂輟牟瀉躡攤招挲剖開榕諞衙壢谫妞鷹莉鴿鬲亨型咖矬陋寶柬俎 ? 熒光物質(zhì) 熒光色素 許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有： ? 異硫氰酸熒光素 （ fluoresceinisothiocyanate， FITC） 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為 ，最大吸收光波長為490 ～ 495nm，最大發(fā)射光波長 520 ～ 530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，有兩種同分異結(jié)構(gòu)，其中異構(gòu)體 Ⅰ 型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好，在冷暗干燥處可保存多年，是應(yīng)用最廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點是： ① 人眼對黃綠色較為敏感，②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。 ? 四乙基羅丹明 （ rhodamine， RIB200） 為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定，可長期保存。最大吸收光波長為 570nm，最大發(fā)射光波長為 595～ 600nm，呈橘紅色熒光。 澧過爽駕蠓背衙媧彼擘獍艉巡扇羚尖蓽琛佘搶困右鴉齋莞嫁環(huán)鬮玻眥彈牛煢番誶糧洼交炸嗌下絞覿塍籽嫠彳鵝綠揭槐籌楞桓強 ? 其他熒光物質(zhì) ? 酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強熒光的物質(zhì)。例如 4甲基傘酮 βD半乳糖苷受 β半乳糖苷酶的作用分解成 4甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長為360nm，發(fā)射光波長為 450nm。其他如堿性酸酶的底物 4甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。 ? 鑭系螯合物某些 3價稀土鑭系元素如銪（ Eu3+）、鋱 （ Tb3+） 、鈰（ Ce3+） 等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光，其中以 Eu3+應(yīng)用最廣。 Eu3+螯合
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