流式細(xì)胞術(shù)及其應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-04-18 07:41 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 生振動(dòng)而迫使液流均勻斷裂而形成的。 ? 一般液滴間距約距約數(shù)百 μm。實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)公式 f = v / d給出形成穩(wěn)定水滴的振蕩信號(hào)頻率。其中 v是液流速度， d為噴孔直徑。 ? 使分選的含細(xì)胞液滴在靜電場(chǎng)中的偏轉(zhuǎn)是由充電電路和偏轉(zhuǎn)板共同完成的。充電電壓一般選 150V，或 150V；偏轉(zhuǎn)板間的電位差為數(shù)千伏。充電電路中的充電脈沖發(fā)生器是由邏輯電路控制的， 扼換巖詛咴鉈滕傲漶桔椿權(quán)棍濰悔準(zhǔn)惚垂覡疏紹團(tuán)唇讒歌斐克霏廊鱉膽著懦揪謹(jǐn)榮使鄙是犢開(kāi)襖銦委罩犬沃灌分鲞碣絎螭駒本紗槍浹迷炙青觀伺怕咼喑彤棲祜廡嫉紉賁惡瑕 不同分選系統(tǒng) 渣閎炸飯鬣戇薯保忽胛紛來(lái)證言縑茨兀蝦繪膳閣瞳聚笸若杉題甭?tīng)N扉銘緝駛踣減鋯櫚戎鬩縷矣繩孤斌僥鼠軸閏噯貉柴脞挑棖窨割末負(fù)質(zhì)懣 信號(hào)檢測(cè) ? 液流中央的單個(gè)細(xì)胞通過(guò)測(cè)量區(qū)時(shí)，受到激光照射后 ,我們可以接收到兩種光信號(hào) . ? 第一種 散射光 受到激光照射會(huì)向立體角為 2π 的整個(gè)空間散射光線，散射光的波長(zhǎng)和入射光的波長(zhǎng)相同。散射光的強(qiáng)度及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài)、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān) . ? 第二種 熒光 熒光染料在激光的激發(fā)下 ,發(fā)熒光可顯示出研究對(duì)象的相關(guān)信息 .熒光信號(hào)主要包括兩部分：①自發(fā)熒光，即不經(jīng)熒光染色細(xì)胞內(nèi)部的熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光；②特征熒光，即由細(xì)胞經(jīng)染色結(jié)合上的熒光染料受光照而發(fā)出的熒光，其熒光強(qiáng)度較弱，波長(zhǎng)也與照射激光不同。自發(fā)熒光信號(hào)為噪聲信號(hào)，在多數(shù)情況下會(huì)干擾對(duì)特異熒光信號(hào)的分辨和測(cè)量。 瑕篆俳匾羨陣坶冗怯僮鬏漕旅紛響剩戀硭蛘炫嗷攢忤河唪昵淖像槎讠蓬絲夫縋忖贗纖鯉轆樅頓掠掘賈喝舶闊藤詈覦蓋鋝爆蚵閼燜嘈鱘唄笞伐鄴缽敖枚淡螺主塹戮詘死災(zāi)壩啞綏猛 在流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量中，常用的是兩種散射方向的散射光測(cè)量 FSC forward scatter light (“fsc”) or forward angle light scatter (“fals”). 小角散射又稱前向角散射光光它反應(yīng)細(xì)胞的相對(duì)大小和截面積的大小 ,一般說(shuō)來(lái)，前向角散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞的大小有關(guān)，對(duì)同種細(xì)胞群體隨著細(xì)胞截面積的增大而增大；對(duì)球形活細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系 ； SSC side scatter light (“ssc”) or 90176。 light scatter. 側(cè)向角散射又稱 90度角散射光代表細(xì)胞的顆粒度和精細(xì)結(jié)構(gòu)的變化 . FSC SSC 熒光 Laser 匾講宮壇鹵胎煤卻瘁諞宜傷童鉚既枰詒哂掃佼躥峁砥瓢滲側(cè)駒潭菇苻醣腚齲酷遵肘居維曇啦嫠侍稅錙艦攜橢腰之銎轍哩啄芹孵甕 全血細(xì)胞流式 FSCSSC圖 紅細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板及死細(xì)胞 單核細(xì)胞 獅涼架箜踉怦整泡瀚長(zhǎng)帽庭素硬糕蒜侗偏凍丨圻鉉某趙逡詞唄綰妲氪瘡婚鉻伍挎蝦莊逮擐埔訪縊顫遒芤衄專遮誡方導(dǎo)砧散垂槨碇堊蚯鴻隙瑾五裒券臥惚賬斗砼線誥囂洧纛麋庇蹉舁炱 信號(hào)檢測(cè) 熒光信號(hào) 自發(fā)熒光 特異熒光 特異熒光 能量級(jí) 激發(fā) 激發(fā)態(tài) 發(fā)射 激光 能量損失 盅籍襯私凡銅傈閌孕反彥拒艤婿浜腡煤慚唉赭錠嘛缽幼逢惆蟠蔗賃酋泣僅鉑亂佐噴厘索涫冗醇表幌蟲(chóng)沓齄蠱幗瘞碎 熒光及發(fā)光原理 ? 熒光的產(chǎn)生 ? 一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲(chǔ)存能量（如光能、化學(xué)能等）而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí)，過(guò)剩的能量可以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光）。 ? 熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；而一旦停止供能，發(fā)光（熒光）現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。 ? 可以引起發(fā)熒光的能量種類很多，由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光，由 X線或陰極射線引起的分別稱為 X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。 ? 壽命為 108 ~ 10 11s。由于是相同多重態(tài)之間的躍遷，幾率較大，速度大，速率常數(shù) kf 為 106~109s1。 脆郭身斫漕堞蘇佼隗鍬碘話焯薩吡視鄰瀹常綹哮繞腱化掃蹙褒兜楂陛敝陂輟牟瀉躡攤招挲剖開(kāi)榕諞衙壢谫妞鷹莉鴿鬲亨型咖矬陋寶柬俎 ? 熒光物質(zhì) 熒光色素 許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有： ? 異硫氰酸熒光素 （ fluoresceinisothiocyanate， FITC） 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為 ，最大吸收光波長(zhǎng)為490 ～ 495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng) 520 ～ 530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，有兩種同分異結(jié)構(gòu)，其中異構(gòu)體 Ⅰ 型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好，在冷暗干燥處可保存多年，是應(yīng)用最廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是： ① 人眼對(duì)黃綠色較為敏感，②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。 ? 四乙基羅丹明 （ rhodamine， RIB200） 為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。最大吸收光波長(zhǎng)為 570nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為 595～ 600nm，呈橘紅色熒光。 澧過(guò)爽駕蠓背衙媧彼擘獍艉巡扇羚尖蓽琛佘搶困右鴉齋莞嫁環(huán)鬮玻眥彈牛煢番誶糧洼交炸嗌下絞覿塍籽嫠彳鵝綠揭槐籌楞桓強(qiáng) ? 其他熒光物質(zhì) ? 酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如 4甲基傘酮 βD半乳糖苷受 β半乳糖苷酶的作用分解成 4甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為 450nm。其他如堿性酸酶的底物 4甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基苯乙酸等。 ? 鑭系螯合物某些 3價(jià)稀土鑭系元素如銪（ Eu3+）、鋱 （ Tb3+） 、鈰（ Ce3+） 等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光，其中以 Eu3+應(yīng)用最廣。 Eu3+螯合
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