流式細(xì)胞儀分析ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 06:44 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 電極偏轉(zhuǎn)板的高壓靜電場(chǎng)，依所帶電荷是正或是負(fù)而發(fā)生向右或向左道偏轉(zhuǎn)，落人指定的收集器中，完成細(xì)胞分選的目的。 （圖 14） （圖 9） 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 18 ㈡ 技術(shù)要求 分選速度：至少 5000個(gè) /秒，與分選細(xì)胞在懸液中的含量有關(guān)。 分選純度：除與儀器的精密度相關(guān)外，還與被分選細(xì)胞與其他細(xì)胞有無(wú)相互重疊相關(guān)。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 19 分選收獲率：指設(shè)定通過(guò)測(cè)量點(diǎn)的分選細(xì)胞與實(shí)際收獲的分選細(xì)胞之間的比率。與被分選細(xì)胞與其他細(xì)胞有無(wú)相互重疊相關(guān)，還與純度有關(guān)，純度 ↑→收獲率 ↓。 分選得率：是指從一群體細(xì)胞懸液中分辨出的目的細(xì)胞總量，再經(jīng)分選后獲得的目的細(xì)胞實(shí)際比率。與分選速度相關(guān)，分選速度 ↑→分選得率 ↓。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 20 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 略！ 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 21 第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫 分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測(cè)樣品制備 制備單細(xì)胞懸液是最關(guān)鍵的第一步。 ㈠ 外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備 單個(gè)核細(xì)胞的分離制備，最常用單次密度梯度離心法 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 22 ㈡ 培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備 ㈢ 新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備 常用方法有機(jī)械法、酶處理法、化學(xué)試劑處理法和表面活性劑處理法。 ㈣ 單細(xì)胞懸液的保存 深低溫保存法 乙醇或甲醇保存法 甲醛或多聚甲醛保存法 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 23 二、免疫分析中常用的 熒光染料與標(biāo)記染色 ㈠ 常用的熒光染料 熒光染料需具備條件： 有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù)； 對(duì) 488nm的激發(fā)光波長(zhǎng)有較強(qiáng)的吸收； 發(fā)射光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)之間有較大的波長(zhǎng)差； 不影響結(jié)合抗體自身的特異性。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 24 常用熒光染料： 異硫氰酸熒光素（ FITC）： 最常用，發(fā)亮綠色熒光，但發(fā)射熒光強(qiáng)度易受 PH值 影響。 羅丹明：發(fā)紅色熒光，缺點(diǎn)是不易溶于水。 藻膽蛋白類：發(fā)橙色至紅色熒光，最常用的是藻紅蛋白（ PE）。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 25 ㈡ 免疫熒光標(biāo)記 熒光染料與細(xì)胞成分結(jié)合的方式： 結(jié)構(gòu)親和式：以電力結(jié)合，為帶正電荷的熒光分子與帶負(fù)電荷的核酸分子磷酸基團(tuán)相互吸引 嵌入結(jié)合方式：光分子直接嵌入核酸堿基對(duì)中。 共價(jià)鍵結(jié)合方式：細(xì)胞 DNA
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