【文章內(nèi)容簡介】 的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（３）,散射光信號(x236。nh224。o),40,流式細(xì)胞儀,第四十頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（３）,熒光(y237。ngguāng)信號（fluorescence，F(xiàn)L） 被熒光染料染色的細(xì)胞在通過測量區(qū)時(shí)，細(xì)胞中的特異熒光染料受激發(fā)而產(chǎn)生熒光信號，其強(qiáng)度表示待檢測物質(zhì)的多少。熒光信號檢測系統(tǒng)由濾片和檢測器組成，與入射激光成90176。放置。濾片用以濾除非熒光信號；熒光檢測器多用光電倍增管。熒光波長與激發(fā)光波長不同且強(qiáng)度轉(zhuǎn)弱，須使用一系列靈敏的光學(xué)元件才能分離出不同的熒光信號。,41,流式細(xì)胞儀,第四十一頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（３）,熒光信號(x236。nh224。o)：細(xì)胞中熒光素含量與信號(x236。nh224。o)的關(guān)系,42,流式細(xì)胞儀,第四十二頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（３）,熒光信號：細(xì)胞(x236。bāo)中熒光素分布與信號的關(guān)系,43,流式細(xì)胞儀,第四十三頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,信號處理系統(tǒng) 檢測器以每秒1000~2000個(gè)細(xì)胞的速度探測細(xì)胞的散射(sǎnsh232。)光和熒光信息，經(jīng)過A/D轉(zhuǎn)換器變成二進(jìn)制信號，儲(chǔ)存于計(jì)算機(jī)中，每個(gè)細(xì)胞的光散射(sǎnsh232。)及熒光測量數(shù)據(jù)一般以列表或矩陣方式儲(chǔ)存。計(jì)算機(jī)通過綜合、處理、分析這些信息，可直接計(jì)算出所需結(jié)果。,44,流式細(xì)胞儀,第四十四頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,電壓(di224。nyā)脈沖定量分析與數(shù)字轉(zhuǎn)換（1）,45,流式細(xì)胞儀,第四十五頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,電壓脈沖(m224。ichōng)定量分析與數(shù)字轉(zhuǎn)換（2）：脈沖高度,46,流式細(xì)胞儀,第四十六頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,細(xì)胞信號的顯示 ① 一維直方圖（histogram） 單參數(shù)直方圖表示一個(gè)參數(shù)與細(xì)胞(x236。bāo)數(shù)量間的關(guān)系。在圖中，橫坐標(biāo)（X軸）表示熒光或散射光強(qiáng)度的相對值，其單位用在流式細(xì)胞(x236。bāo)儀中用“道（channel）”表示，道數(shù)與熒光強(qiáng)度之間是線性或?qū)?shù)關(guān)系，依儀器分析時(shí)放大器的性質(zhì)而定。縱坐標(biāo)（Y軸）通常代表細(xì)胞(x236。bāo)出現(xiàn)的頻率或相對細(xì)胞(x236。bāo)數(shù)量，絕對細(xì)胞(x236。bāo)數(shù)較少使用。在直方圖中，每個(gè)峰表示在某些方面性質(zhì)相同的一群細(xì)胞(x236。bāo)，若用“標(biāo)尺”把各峰分開成區(qū)間，即可統(tǒng)計(jì)分析出各個(gè)區(qū)間內(nèi)細(xì)胞(x236。bāo)所占百分比、及光散射或熒光強(qiáng)度的峰值、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)等。,47,流式細(xì)胞儀,第四十七頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,直方圖,48,流式細(xì)胞儀,第四十八頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,直方圖,49,流式細(xì)胞儀,第四十九頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,直方圖,50,流式細(xì)胞儀,第五十頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,直方圖 標(biāo)準(zhǔn)(biāozhǔn)熒光微球的熒光直方圖：測試前必須用標(biāo)準(zhǔn)(biāozhǔn)熒光微球校準(zhǔn)儀器。,51,流式細(xì)胞儀,第五十一頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,直方圖 T淋巴細(xì)胞單色直接免疫熒光染色的熒光直方圖：以藍(lán)色直方圖為同型對照設(shè)定陰性(yīnx236。ng)與陽性細(xì)胞界標(biāo)（Marker，M1），凡在M1左邊的細(xì)胞為陰性(yīnx236。ng)，右邊的細(xì)胞為陽性。,52,流式細(xì)胞儀,第五十二頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,細(xì)胞信號分析的主要形式 ② 二維點(diǎn)圖（dot plot） 二維點(diǎn)圖表示兩個(gè)參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量間的關(guān)系。任選FSC、SSC、FL1~FL3中兩個(gè)參數(shù)為X軸和Y軸，就可得到二維點(diǎn)圖。在二維點(diǎn)圖中，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞性質(zhì)的不同，在二維點(diǎn)圖上就會(huì)出現(xiàn)若干群細(xì)胞，即為不同的細(xì)胞亞群。若用“門”把各亞群細(xì)胞分開(fēn kāi)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，可得各亞群細(xì)胞所占百分比、及平均熒光強(qiáng)度等。,53,流式細(xì)胞儀,第五十三頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,二維點(diǎn)圖,54,流式細(xì)胞儀,第五十四頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,二維點(diǎn)圖 白細(xì)胞散射光FSC/SSC二維點(diǎn)圖及二維密度(m236。d249。)圖。,55,流式細(xì)胞儀,第五十五頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,二維點(diǎn)圖 T細(xì)胞(x236。bāo)亞群CD3/CD4和CD3/CD8二維點(diǎn)圖：CD3/CD4雙陽性細(xì)胞(x236。bāo)（T輔助細(xì)胞(x236。bāo)）占45.04%。CD3/CD8雙陽性細(xì)胞(x236。bāo)（T抑制細(xì)胞(x236。bāo)）占34.05%。,56,流式細(xì)胞儀,第五十六頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,細(xì)胞信號分析的主要形式 ③ 假三維圖及二維等高圖（contour） 假三維圖：任選FSC、SSC、FL1~FL3中任何兩個(gè)參數(shù)為X軸和Y軸，以細(xì)胞數(shù)量為Z軸，就構(gòu)成了三維圖。因Z軸細(xì)胞數(shù)量不是(b249。 shi)直接測量參數(shù)，實(shí)際上仍是二維圖，故稱為假三維圖。該圖對細(xì)胞亞群的觀察更為直觀。 二維等高圖：用不同高度的平面切割假三維圖，將這些切割投影到X、Y平面上，就形成了等高圖，等高圖由類似地圖上的等高線組成，等高線密集的地方，就是細(xì)胞數(shù)變化快的地方。該圖對觀察細(xì)胞的分布趨勢優(yōu)于二維點(diǎn)圖。,57,流式細(xì)胞儀,第五十七頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,假三維圖及等高圖 白細(xì)胞散射光FSC、SSC假三維圖（左）與等高圖（右）。,58,流式細(xì)胞儀,第五十八頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,細(xì)胞信號分析(fēnxī)的主要形式 ④ 三維圖（3D）及四參數(shù)平面圖 三維圖：在FSC、SSC、FL1~FL3中任選三個(gè)參數(shù)為X軸、Y軸和Z軸，就構(gòu)成了一個(gè)三維圖，在三維空間中，每一群細(xì)胞各處于獨(dú)立的空間位置。該圖對復(fù)雜的細(xì)胞亞群分析更為直觀、準(zhǔn)確，但對其數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析較難。 四參數(shù)平面圖：四參數(shù)平面圖分析對數(shù)據(jù)分布的觀察也有一定意義。,59,流式細(xì)胞儀,第五十九頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,三維圖 白細(xì)胞CD4CD1SSC三參數(shù)三維圖： 紅色淋巴細(xì)胞 黃色嗜堿性(jiǎn x236。nɡ)粒細(xì)胞 天藍(lán)單核細(xì)胞 藍(lán)色中性粒細(xì)胞 品紅嗜酸性粒細(xì)胞,60,流式細(xì)胞儀,第六十頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,四參數(shù)平面圖 白細(xì)胞FSC、SSC、CD4CD1SSC四參數(shù)平面圖： 紅色淋巴細(xì)胞 黃色嗜堿性(jiǎn x236。nɡ)粒細(xì)胞 天藍(lán)單核細(xì)胞 藍(lán)色中性粒細(xì)胞 品紅嗜酸性粒細(xì)胞。,61,流式細(xì)胞儀,第六十一頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,細(xì)胞信號的分析 散射光信號(x236。nh224。o)分析 熒光信號分析 散射光/熒光信號分析,62,流式細(xì)胞儀,第六十二頁，共九十四頁。,I I 流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)（４）,散射光分析(fēnxī) 散射光（FSC、SSC）可用直方圖、二維點(diǎn)圖、假三維圖、三維圖等分析,A白細(xì)胞 FSC直方圖。 B白細(xì)胞 SSC直方圖。 C白