20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry-fcm)描述(編輯修改稿)
2024-11-15 05:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 復(fù)制，使細(xì)胞的DNA含量由2倍體（2C 46條染色體）變?yōu)?倍 體（4C）。G1和G2期為DNA合成前、后間期，此期無DNA的合成，但RNA和 蛋白質(zhì)進行合成。M期為有絲分裂期，在此期一個細(xì)胞分裂為2個細(xì)胞。 細(xì)胞內(nèi)的92條染色體分裂成2組46條染色體，使每個細(xì)胞內(nèi)具有46條染色 體。在M期分裂成兩個子細(xì)胞之前，G2和M期細(xì)胞的DNA含量均為恒定的4C 。M期以后部分細(xì)胞進入(j236。nr249。)G1期，繼續(xù)進行增殖，部分細(xì)胞進入(j236。nr249。)G0期，即靜 止期，不再繼續(xù)增殖。因此，F(xiàn)CM分析一個群體細(xì)胞峰DNA倍體與細(xì)胞周 期時，將DNA含量直方圖分為三部分，即G0/G1,S,G2/M期三個細(xì)胞峰。 G0/G1和G2/M細(xì)胞峰DNA的含量成正態(tài)分布，S期細(xì)胞峰則是一個加寬的正 態(tài)分布。,第四十二頁，共八十一頁。,2）利用DNA的熒光染料，如PI（Propidium iodide碘化丙啶），與細(xì)胞內(nèi)的DNA結(jié)合(ji233。h233。)，可反映細(xì)胞內(nèi)DNA含量。采用DNA直方圖顯示。具有2C DNA含量細(xì)胞為G0/G1期細(xì)胞，4C DNA含量細(xì)胞為G2/M期細(xì)胞，DNA含量介于兩者之間的細(xì)胞為S期細(xì)胞。,第四十三頁，共八十一頁。,3）DNA倍體：主要比較(bǐji224。o)G0/G1期細(xì)胞DNA含量的變化。用DNA指數(shù)（DI）表示。 DNA指數(shù)=測量樣本G0/G1期DNA含量/正常人淋巴細(xì)胞G0/G1期DNA含量 以正常人淋巴細(xì)胞作為對照。 正常細(xì)胞DNA指數(shù)為1.00，DNA指數(shù)＞1，為超2倍體，＜1為亞2倍體，兩者可統(tǒng)稱為非整倍體。非整倍體細(xì)胞中腫瘤的特異性標(biāo)志，實體腫瘤中出現(xiàn)頻率較高。,第四十四頁，共八十一頁。,第四十五頁，共八十一頁。,第四十六頁，共八十一頁。,第四十七頁，共八十一頁。,第四節(jié) 凋亡(diāo w225。nɡ)檢測,1）FCMDNA檢測（DNA亞G1峰的檢測）：利用PI染色(rǎns232。)，檢測具有亞G1期DNA含量的細(xì)胞比例，代表凋亡細(xì)胞數(shù)。其原理為在凋亡過程中，細(xì)胞內(nèi)核酸酶的釋放，將DNA降解，分解成小的片段，在標(biāo)本制備中的固定處理時，細(xì)胞膜的完整性被破壞，使細(xì)胞內(nèi)降解的DNA片段從細(xì)胞內(nèi)流出，造成總體DNA含量減少，成為亞2倍體。注：檢測的凋亡細(xì)胞數(shù)代表晚期的凋亡細(xì)胞比例，且易受標(biāo)本中的死細(xì)胞和碎片的干擾，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。 可參看文章： http://www.biox.cn/content/cell/20040914791.htm http://www.biox.cn/content/cell/20040914792.htm,第四十八頁，共八十一頁。,2）DNA鏈損傷“TUNEL”法 3）AnnexinVFITC/PI雙染法 4）線粒體細(xì)胞膜電位(di224。n w232。i)的檢測 5）凋亡相關(guān)基因的檢測——免疫標(biāo)記法檢測基因,第四十九頁，共八十一頁。,第五十頁，共八十一頁。,第五十一頁，共八十一頁。,第五節(jié) 免疫功能(gōngn233。ng)的檢測,（1）利用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)，對PB中淋巴細(xì)胞比例，及淋巴細(xì)胞中T、B、NK細(xì)胞的比例，及T細(xì)胞亞群進行檢測。如CD3+（總T細(xì)胞）；CD19+（總B細(xì)胞），CD3/（CD16+5（NK細(xì)胞）。3+/CD4+（Th/Ti）：輔助/誘導(dǎo)；CD3+/CD4+/CD5RA+：na239。ve輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞；CD3+/CD4+/CD45R0+：記憶性輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞；D3+/CD8+（Ts/Tc）：抑制/殺傷；CD3+/CD8/45RA+：na239。ve抑制/殺傷T細(xì)胞；CD3+/CD8+/CD45R0+：記憶性抑制/殺傷T細(xì)胞。胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測：CD4+/IL4+，Th1細(xì)胞，CD4+/IFNγ+。 （2）臨床應(yīng)用：原發(fā)性或繼發(fā)性免疫缺陷病、自身免疫性疾病(j237。b236。ng)、淋巴細(xì)胞增殖病、腫瘤療效觀察與預(yù)后判斷、移植免疫檢測等。,第五十二頁，
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