20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)描述(編輯修改稿)
2024-11-15 05:41 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 式樣本，由于細(xì)胞的自發(fā)熒光、熒光抗體會與待測標(biāo)本中的細(xì)胞發(fā)生少量非特異性結(jié)合，在流式細(xì)胞儀上可檢出一定的信號，這部分信號稱為基礎(chǔ)熒光域值。 在流式標(biāo)本檢測過程中，通常需要通過調(diào)節(jié)電壓將陰性細(xì)胞的基礎(chǔ)熒光域值置于95%或99%的置信區(qū)間內(nèi)，作為陰性對照可信區(qū)間設(shè)定。,第三十頁，共六十六頁。,一、流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)(ji233。g242。u)與功能,1. 流式細(xì)胞儀基本(jīběn)結(jié)構(gòu) 2. 流式細(xì)胞儀的基本功能與應(yīng)用,第三十一頁，共六十六頁。,2. 流式細(xì)胞儀的基本功能與應(yīng)用(y236。ngy242。ng),定性或定量分析功能 細(xì)胞膜：細(xì)胞表面抗原，表面糖類(t225。nɡ l232。i)，表面受體，膜電位，膜結(jié)合鈣離子，細(xì)胞表面電荷等，這對確定細(xì)胞的性質(zhì)及其功能重要。 細(xì)胞質(zhì)：各種細(xì)胞成分，包括蛋白質(zhì)、RNA、各種細(xì)胞器中的特殊成分、各種抗原、基因編碼蛋白、細(xì)胞因子等。 細(xì)胞核：DNA、RNA、蛋白質(zhì)等 分選功能 可將具有特定性狀或功能的細(xì)胞從混合細(xì)胞群中分離出來，再進(jìn)行分析或培養(yǎng)。優(yōu)點：分選純度高（可達(dá)99%），分選回收率高，可分選活細(xì)胞。,第三十二頁，共六十六頁。,1. 流式細(xì)胞儀基本(jīběn)結(jié)構(gòu),流動室與液流系統(tǒng) 光源與光學(xué)系統(tǒng) 激發(fā)光源 光學(xué)系統(tǒng) 信號收集與光電轉(zhuǎn)換(zhuǎnhu224。n)系統(tǒng) 計算機(jī)與分析系統(tǒng),第三十三頁，共六十六頁。,流動(lid242。ng)室與液流系統(tǒng),第三十四頁，共六十六頁。,,,PMT,PMT,PMT,PMT,二分(232。r fēn)鏡,,帶通濾光片,激光(jīguāng),1,2,3,4,Flow cell,,,由若干組透鏡、濾光片和分光鏡等光學(xué)元件組成，它們分別將不同(b249。 t243。nɡ)波長的光信號送入到不同(b249。 t243。nɡ)的探測器。濾光片主要分為四類： 長通濾光片（LP）、短通濾光片（SP）、帶通濾光片（BP）和二分鏡,光學(xué)系統(tǒng),第三十五頁，共六十六頁。,第三十六頁，共六十六頁。,第三十七頁，共六十六頁。,激發(fā)光源,激光(Laser)是一種相干光源，它能提供單一波長、單一方向(fāngxi224。ng)、同步的穩(wěn)定光照 激光波長: 臺式機(jī)為固定波長488nm, 633nm ，大型機(jī)波長譜線寬包括325，457.9，488, 514.5，520.8，530.9，568.3， 633，647 nm,第三十八頁，共六十六頁。,信號收集與光電轉(zhuǎn)換(zhuǎnhu224。n)系統(tǒng),主要由光電轉(zhuǎn)換器件、放大器和信號處理電路組成 光電轉(zhuǎn)換器件主要功能(gōngn233。ng)是將光信號轉(zhuǎn)換成電流信號。由光電二極管和光電倍增管（PMT）來執(zhí)行。 放大器分兩類：線性放大和對數(shù)放大。 信號處理系統(tǒng)的主要功能是將電信號轉(zhuǎn)變成脈沖信號、數(shù)字信號最終傳送給計算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行處理。,第三十九頁，共六十六頁。,計算機(jī)與分析(fēnxī)系統(tǒng),計算機(jī)系統(tǒng)用于控制整個儀器的運行，數(shù)據(jù)(sh249。j249。)采集和數(shù)據(jù)(sh249。j249。)分析。 各公司所產(chǎn)的流式細(xì)胞儀都有自己特有的分析系統(tǒng)。,第四十頁，共六十六頁。,第二節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的數(shù)據(jù)分析,一、參數(shù) 前向散射光FSC: 反映顆粒的大小(d224。xiǎo) 側(cè)向散射光SSC: 細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度 熒光FL: 細(xì)胞被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少 二、數(shù)據(jù)的顯示與分析 三、設(shè)門,第四十一頁，共六十六頁。,二、數(shù)據(jù)的顯示(xiǎnsh236。)與分析,1.單參數(shù)(cānsh249。)直方圖 2.二維散點圖 3.二維等高線圖 4.假三維圖 5.三維圖,第四十二頁，共六十六頁。,以分布直方圖( distribution histogram )來顯示，橫軸為該參數(shù)測量強(qiáng)度相對值，單位是道數(shù)。強(qiáng)度分布可以(kěyǐ)是線性的，也可以(kěyǐ)是對數(shù)的?？v軸一般是細(xì)胞數(shù)或細(xì)胞出現(xiàn)的頻數(shù)。,1.單參數(shù)(cānsh249。)直方圖,第四十三頁，共六十六頁。,看圖技巧： 1.先看橫、縱坐標(biāo)，了解檢測目的； 2.看圖形分布，直方圖峰形越往右移，代表其熒光強(qiáng)度越強(qiáng)； 3.M1的確定(qu232。d236。ng)是根據(jù)陰性對照細(xì)胞的基礎(chǔ)熒光域值設(shè)定的，峰形右移，熒光信號大于基礎(chǔ)熒光域值（M1），表示陽性（M2）； 4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計時，檢測目的物一般用各Marker區(qū)內(nèi)的細(xì)胞所占
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