20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)描述-全文預(yù)覽
【正文】 對(duì)數(shù)的。,二、數(shù)據(jù)的顯示(xiǎnsh236。 各公司所產(chǎn)的流式細(xì)胞儀都有自己特有的分析系統(tǒng)。j249。 放大器分兩類：線性放大和對(duì)數(shù)放大。,信號(hào)收集與光電轉(zhuǎn)換(zhuǎnhu224。,第三十六頁(yè)，共六十六頁(yè)。nɡ)波長(zhǎng)的光信號(hào)送入到不同(b249。ng)室與液流系統(tǒng),第三十四頁(yè)，共六十六頁(yè)。,1. 流式細(xì)胞儀基本(jīběn)結(jié)構(gòu),流動(dòng)室與液流系統(tǒng) 光源與光學(xué)系統(tǒng) 激發(fā)光源 光學(xué)系統(tǒng) 信號(hào)收集與光電轉(zhuǎn)換(zhuǎnhu224。 細(xì)胞質(zhì)：各種細(xì)胞成分，包括蛋白質(zhì)、RNA、各種細(xì)胞器中的特殊成分、各種抗原、基因編碼蛋白、細(xì)胞因子等。ngy242。,一、流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)(ji233。y,4.光譜(guāngpǔ)重疊與熒光補(bǔ)償,利用電子技術(shù)或計(jì)算機(jī)軟件等方法將串入相鄰熒光(y237。 脈沖面積（FLnA）是采用積分計(jì)算的熒光通量。每種顏色的熒光占用一個(gè)(yī ɡ232。采用這種方法計(jì)算該顆粒的體積就是電子體積。,2.Coulter效應(yīng)(xi224。nɡ)三群，淋 巴細(xì)胞、單核 細(xì)胞和粒細(xì)胞。 xi224。o)術(shù)語(yǔ),1.前向散射與側(cè)向散射 2. Coulter效應(yīng)與電子體積(tǐjī) 3.熒光信號(hào)及其面積與寬度 4.光譜重疊與熒光補(bǔ)償 5.細(xì)胞基礎(chǔ)熒光域值與陰性對(duì)照置信區(qū)間,第二十二頁(yè)，共六十六頁(yè)。方法同上，先準(zhǔn)備各種標(biāo)記的熒光陰性對(duì)照，確定合適的電壓，并逐一調(diào)節(jié)各熒光標(biāo)記抗體，與其他熒光對(duì)照，然后調(diào)節(jié)特異性熒光對(duì)每個(gè)熒光的補(bǔ)償。ng)補(bǔ)償條件后，即補(bǔ)償調(diào)節(jié)完畢。,第十八頁(yè)，共六十六頁(yè)。,（2）FITC標(biāo)記(biāoj236。nlu242。 3. 分選收獲率: 9095% 分離后所得的細(xì)胞亞群數(shù)占原細(xì)胞樣品中該亞群細(xì)胞數(shù)的百分比。 對(duì)于流式樣本來(lái)說(shuō)，設(shè)置陰性對(duì)照是必須的，且陰性置信區(qū)一旦設(shè)定，將作為后續(xù)樣本的陰、陽(yáng)性判斷的基礎(chǔ)，不能隨意變動(dòng)。,調(diào)節(jié)電壓可改變目的細(xì)胞的熒光信號(hào)強(qiáng)弱，那么如何判斷特異性熒光信號(hào)的有無(wú)？ 需要設(shè)置陰性對(duì)照以確定細(xì)胞自身基礎(chǔ)(jīchǔ)熒光域值，并通過(guò)它來(lái)判斷待測(cè)樣本中是否有特異性熒光信號(hào)。 pi224。nh224。,三、流式細(xì)胞術(shù)基本原理,1.流式細(xì)胞術(shù)分析的基本原理 2.流式細(xì)胞術(shù)分選的基本原理 3.流式細(xì)胞儀熒光(y237。對(duì)于直接標(biāo)記多色樣本，在單色基礎(chǔ)上另加補(bǔ)償對(duì)照。nzhěng)的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本設(shè)置,流式細(xì)胞術(shù)的基本原理是利用細(xì)胞標(biāo)記前后的熒光(y237。)的補(bǔ)償調(diào)節(jié)。ngdi233。空白對(duì)照的主要作用用于確定待測(cè)標(biāo)本的基礎(chǔ)熒光域值或檢測(cè)染色方法是否成功。bāo)進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，通常用于檢測(cè)抗體是否有問(wèn)題或確定實(shí)驗(yàn)方法的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性。ngx236。ng)對(duì)照,作用是調(diào)節(jié)各熒光探測(cè)器合適的放大倍數(shù)，將儀器歸零，即確定待測(cè)標(biāo)本的基礎(chǔ)熒光域值 免疫球蛋白同型對(duì)照（同型抗體為沒(méi)有(m233。ngběn)設(shè)置,1. 常用對(duì)照 陰性對(duì)照 陽(yáng)性(y225。,一、流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)(ji233。)、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分選的技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù) Flow cytometry，F(xiàn)CM,第一頁(yè)，共六十六頁(yè)。g232。) 第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用,第三頁(yè)，共六十六頁(yè)。,四、流式細(xì)胞術(shù)的樣本(y224。,陰性(yīnx236。,陽(yáng)性(y225。bāo)）細(xì)胞(x236。有些細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)會(huì)同樣被激發(fā)(jīfā)而產(chǎn)生自發(fā)熒光。ng)對(duì)照,由于光譜的重疊(ch243。ngdi233。,2.一套完整(w225。 直接標(biāo)記樣本 對(duì)于單色樣本應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照（同型抗體對(duì)照）和待測(cè)樣本。,第十頁(yè)，共六十六頁(yè)。 熒光信號(hào)(x236。,R1：淋巴細(xì)胞 R2：?jiǎn)魏思?xì)胞 R3：粒細(xì)胞 R4：紅細(xì)胞裂解碎片(su236。,第十三頁(yè)，共六十六頁(yè)。i)，然后對(duì)陰性置信區(qū)進(jìn)行界定，大于陰性置信區(qū)的熒光信號(hào)為特異性熒光信號(hào)。u) 分離后的樣品中該亞群細(xì)胞所占的百分比。ng)設(shè)置,以FITC、PE雙色分析為例： （1）先調(diào)節(jié)陰性對(duì)照管（即同型對(duì)照IgGFITC、IgGPE）：先將原補(bǔ)償清零，通過(guò)調(diào)節(jié)電壓，使陰性群落(q,第十七頁(yè)，共六十六頁(yè)。 注：首先要知道雙陰性細(xì)胞的情況，其次是在檢測(cè)管中，必須要有FITC單陽(yáng)性細(xì)胞和雙陰性細(xì)胞。 （4）當(dāng)設(shè)置好以上(yǐsh224。xū)做各熒光間的補(bǔ)償。ngy224。),前向散射光 (forward scatter)
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