20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)樣品制備(完整)-全文預(yù)覽
【正文】 236。 ③加入胰酶+EDTA液510ml，在37℃恒溫水浴30分鐘，間斷振蕩35次。,實(shí)驗(yàn)步驟： ①將組織切成薄片(b225。s液100ml，封裝高壓消毒，置04℃保存。,第十三頁，共三十一頁。 ④加入生理鹽水1020ml，沖洗研器。,第十二頁，共三十一頁。,?網(wǎng)搓法： ①將100目銅網(wǎng)扎在小燒杯(shāobēi)上。 ⑥以300目尼龍網(wǎng)過濾除去細(xì)胞團(tuán)塊。 ②用剪刀將組織剪至勻漿狀。ih233。 ④終止消化，收集細(xì)胞懸液，以尼龍網(wǎng)(200目)過濾，除去大團(tuán)塊，以低速離心除去細(xì)胞碎片。,酶學(xué)方法的一般程序： ①將適合于酶消化的組織(zǔzhī)置于離心管中。,為使組織細(xì)胞分散下來，應(yīng)用酶學(xué)方法必須注意條件的選擇和影響因素： ※ 酶需要溶解于適當(dāng)?shù)娜芤褐?，而這種溶液不致于造成 酶效價(jià)降低 ※ 注意組織在消化液中的消化時(shí)間 ※注意酶活性的PH值 ※ 注意酶的適用濃度 ※ 隨時(shí)注意影響酶活性的其他因素 各種酶的分散程度都有一定(yīd236。)。,新鮮(xīn xiān)實(shí)體組織單細(xì)胞懸液制備方法如下： ⒈酶消化法 ⒉機(jī)械法 ?剪碎法 ?網(wǎng)搓法 ?研磨法 ⒊化學(xué)試劑處理法,第六頁，共三十一頁。,二、實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 ㈠新鮮實(shí)體組織 新鮮實(shí)體組織是手術(shù)或活檢后根據(jù)檢測(jiǎn c232。b232。 加入少量0.25%胰酶，消化細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀察，見細(xì)胞稍變圓時(shí)，立即終止消化（假如含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基），收集細(xì)胞，離心后去上清，PBS液洗滌細(xì)胞一次，離心去掉上清液，約留0.5ml細(xì)胞懸液，用振蕩器使細(xì)胞分散。,第二頁，共三十一頁。,FCM的樣品制備包括單分散細(xì)胞懸液制備技術(shù)，細(xì)胞生物學(xué)特征標(biāo)記技術(shù)及熒光染色技術(shù)，F(xiàn)CM是對細(xì)胞或細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和某些功能進(jìn)行定量測定(c232。ngpǐn)制備,第一頁，共三十一頁。 FCM的實(shí)驗(yàn)對象是單細(xì)胞或單細(xì)胞核的懸液，在FCM技術(shù)中制備出合格的單細(xì)胞懸液是非常重要的環(huán)節(jié)，這些單細(xì)胞懸液主要來源于單層細(xì)胞、血液、脫落細(xì)胞、實(shí)體組織及石蠟包埋組織等。bāo) ㈠貼壁的單層培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備 操作步驟： 將單層培養(yǎng)細(xì)胞(對數(shù)生長期)中的舊培養(yǎng)液倒掉。,（二）懸浮培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備(zh236。,第四頁，共三十一頁。,第五頁，共三十一頁。zh236。,第七頁，共三十一頁。,第八頁，共三十一頁。C或室溫)，消化期間要間接振蕩或吹打。,⒉機(jī)械法 機(jī)械法分裂實(shí)體組織包括：用剪刀剪碎或用鋒利的解剖刀剁碎，用勻漿器勻漿，用細(xì)注射針頭抽吸細(xì)胞以分散細(xì)胞，采用網(wǎng)搓法同樣也能獲得大量的細(xì)胞，機(jī)械法易造成細(xì)胞懸液中細(xì)胞碎片，所以機(jī)械法常與其他方法配合(p232。,常用的幾種機(jī)械法制備過程如下： ?剪碎法： ①將組織塊放入平皿中，加入少量的鹽水。 ⑤離心沉淀1000prm35分鐘，再用生理鹽水洗三次，每次以短時(shí)低速離心沉淀(500800prm)去除細(xì)胞碎片。,第十一頁，共三十一頁。 ⑤70%乙醇固定，置4℃冰箱備用。 ③轉(zhuǎn)動研棒，研至勻漿即可。xīn)沉淀。 試劑配制： ①0.2%EDTA配制 EDTA0.2g溶解后，加入Hank180。,第十四頁
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1