【正文】 盛有被消化組織的試管中。 ⑦70%冰乙醇(yǐ ch,⒊化學試劑處理法 化學試劑處理法的主要(zhǔy224。 pi224。)的酒精5ml，每步10分鐘，去乙醇，加入蒸餾水35ml，10分鐘后棄之。,第二十一頁，共三十一頁。 3.放入37℃恒溫箱內(nèi)孵育3040分鐘,取出培養(yǎng)瓶 ,將血傾倒掉,用生理鹽水將培養(yǎng)瓶輕輕沖洗(chōngxǐ)一次,以去掉殘留的血液,這時培養(yǎng)瓶壁上貼附了大量的單核細胞,因為單核細胞具有短時培養(yǎng)期內(nèi)貼附快的特點 ,而其他細胞沒有這個特性,所以利用這一特性進行短時培養(yǎng)可獲得較純的單核細胞。xīn)500800prm12分鐘,棄上清。 ㈤ 沖洗液樣品單細胞懸液制備 1.用300500ml生理鹽水沖洗胃或膀胱，沖洗一定時間后，吸出沖洗液放入容器中，于冰箱內(nèi)置612小時。3.70%冷乙醇固定，置于冰箱備檢,第三十一頁，共三十一頁。xīn)沉淀，再以生理鹽水漂洗23次，每次500800prm離心(l237。 2.收集細胞懸液,以1500prm離心沉淀,用生理鹽水洗滌2次,每次5分鐘,棄上清后加入70%乙醇3ml固定備檢。 ⒌再以Hank′s液洗滌2次，即可獲得純度大于95%以上的粒細胞。 切片不可過薄或過厚，過薄則碎片增多(zēnɡ duō)，影響流式分析結(jié)果，過厚造成脫蠟不凈或脫蠟時間過長，一般以4050μm為宜。,實驗方法： ①石蠟包埋組織在切片機上切取4050μm厚的組織片35片。 ④用300目尼龍網(wǎng)過濾，離心沉淀1000prm，5分鐘，再以生理鹽水洗23次，離心500800prm，12分鐘。 ⑤收集細胞懸液，并經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾，離心(l237。 ③加入10ml生理鹽水。ng)的限制性，特別是在進行免疫標記實驗時，酶處理可能改變細胞膜的成分，從而影響細胞亞群的區(qū)分。i) 操作步驟： 離心去除舊培養(yǎng)液，PBS液洗滌細胞一次，離心去掉上清液，約留0.5ml細胞懸液，用振蕩器使細胞分散。流式細胞術(shù)的樣品(y224。 如果不是及時上機檢測，則需要對細胞進行固定，常規(guī)固定液為70%乙醇，然后保存于4℃冰箱中。應指出，用于組織分散的很多酶是不夠純的，不僅含有一種占主導的酶，而且在不同程度上也混有其他污染物質(zhì)，它們的活性可能有利于組織分散，也可能對組織的結(jié)構(gòu)或功能產(chǎn)生不利的影響。 ④用吸管吸取組織勻漿，先以100目尼龍網(wǎng)過濾到試管中。xīn)沉淀500800prm，12分鐘，再用生理鹽水洗三次，離心(l237。 ⑤70%乙醇固定置冰箱中被檢。 ②將切取的組織片放入試管中。,第二十頁，共三十一頁。,第二十三頁，共三十一頁。,第二十七頁，共三十一頁。xīn)沉淀2分鐘，棄上清。,。 3.70%冷乙醇固定，置于冰箱備檢。xīn)沉淀,再用生理鹽水洗滌2次,離心(l237。 2.1640培養(yǎng)液10.0ml,放入培養(yǎng)瓶內(nèi),將稀釋血加入 培養(yǎng)液中,混勻,與培養(yǎng)瓶接觸面要大。)介紹幾種血細胞的分離制備方法。 ④水化：依次加入100%、95%、70%、50%梯度(tī d249。,實驗證實，用化學試劑處理組織導致細胞成活率降低，細胞產(chǎn)額較低，細胞碎片(su236。,第