流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序sop(編輯修改稿)
2025-06-18 19:32 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 日 復(fù)審人： 規(guī)程編寫者： 審 批 者： 批準(zhǔn)日期： 年 月 日 文件分發(fā)部門和／或個(gè)人 院檔案室保管者： 檢驗(yàn)科 主任： 檢驗(yàn)科 實(shí)驗(yàn)室： 血小板膜表面抗體測(cè)定 方 法 流式細(xì)胞儀 (BeckmanCoulter， 貝克曼庫(kù)爾特 ) 原理 ： 直接免疫熒光法。 FITC 標(biāo)記的各型多克隆抗體，加到經(jīng)離心富集的血小板中，與血小板膜上的相應(yīng)的 IgGFc 片段結(jié)合，經(jīng)過(guò)洗滌（和固定）等步驟后，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析。 標(biāo)本采集與處理 受檢者的準(zhǔn)備 檢查對(duì)象生活飲食處于日常狀態(tài)，空腹采血。 采集部位 靜脈采血 抗凝劑 EDTA 或肝素抗凝血 要求 1．樣本量至少 1ml。 2．樣本 應(yīng)在采集后 6 小時(shí)內(nèi)完成，冷凍的標(biāo)本或已固定的標(biāo)本不能用。 3．樣本血小板計(jì)數(shù)應(yīng)在 150450 109/L 之間。若 450 109/L， 樣本需要稀釋，用 PBS 稀釋；若 150 109/L，應(yīng)多采集進(jìn)行富集達(dá)到流式檢測(cè)的細(xì)胞數(shù)。 4．溶血樣本不能用。 試劑 品牌 劑型 規(guī)格 貯存 聯(lián)科 成分 1：?jiǎn)慰寺】贵w 液體 1ML 2— 8℃ 2：全血溶血試劑 液體 A：甲酸 液體 70ML 室溫 B：碳酸鈉等 液體 32ML 室溫 C：多聚甲醛 液體 14ML 室溫 3：鞘液 液體 20L 室溫 4：清洗液 液體 5L 室溫 5：熒光微球 液體 10ML 28℃ 質(zhì)控品 BEKAMANCOULTER 產(chǎn)品，未開瓶的試劑于 28℃保存，可在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，稀釋的試劑于 28℃可穩(wěn)定 2 周；每天校準(zhǔn)一次：遇特殊情況隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。 儀器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 操作 ： 富集血小板法 ： 1） 800r/min*15min,取上清， 2）加 4－ 5ml 鞘液， 2021r/min*3min,棄上清，重復(fù)一次。 3)分別向已編好號(hào)的試管中加入 10 ul 單克隆抗體和同型對(duì)照 (IgGFITC) 4)分別向試管中加入準(zhǔn)備好的 10u1 含血小板的 PBS（血小板的量約為 106）（血小板若在正常范圍，稀釋到原量直接取 10u1。）。 5)混勻，避光，室溫孵育 2030 分鐘 6)洗或不洗， 上機(jī)測(cè)樣 全血法： 1） 加 4－ 5ml 鞘液 ， 1500r/min*15min,棄上清 ， 后同上 3）－ 6） 報(bào)告結(jié)果 報(bào)告百分?jǐn)?shù) 操作性能 精密度 批內(nèi)五次重復(fù) CV2％ 靈敏度 500— 1000 個(gè)熒光素分子 參考值 IgA% IgG% IgM% IgD% 臨床意義 為免疫性血小板減少性紫癜 (ITP)診斷、治療、預(yù)后估計(jì)的重要指標(biāo)，在 ITP、膠原性疾病時(shí)升高。 方案（ Protocol） 紅細(xì)胞抗體測(cè)定 (流式細(xì)胞儀 ) 醫(yī)院檢驗(yàn)科 操作規(guī)程文件號(hào)： 200 年 月 日起實(shí)施 第 1 版 (共 2 頁(yè) ) 本規(guī)程每 2 年復(fù)審一次 復(fù)審日期： 年 月 日 復(fù)審人： 規(guī)程編寫者： 審 批 者： 批準(zhǔn)日期： 年 月 日 文件分發(fā)部門和／或個(gè)人 院檔案室保管者： 檢驗(yàn)科 主任： 檢驗(yàn)科 實(shí)驗(yàn)室： 紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)構(gòu)測(cè)定 （紅細(xì)胞抗體） 方法 流式細(xì)胞儀 (BeckmanCoulter， 貝克曼庫(kù)爾特 ) 原理 ： 直接免疫熒光法。 FITC 標(biāo)記的 各型多克隆抗體，加到全血中，與紅細(xì)胞膜上的相應(yīng)的 IgGFc 片段結(jié)合，經(jīng)過(guò)洗滌 (和固定 )等步驟后，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析。 標(biāo)本采集與處理 受檢者的準(zhǔn)備 檢查對(duì)象生活飲食處于日常狀態(tài)，空腹采血。 采集部位 靜脈采血 抗凝劑 EDTA 或肝素抗凝血 要求 1．樣本量至少 1ml。 2．樣本應(yīng)在采集后 6 小時(shí)內(nèi)處理，冷凍的標(biāo)本不能用。 3．溶血樣本不能用。 試劑 品牌 劑型 規(guī)格 貯存 聯(lián)科 成分 1：?jiǎn)慰寺】贵w 液體 1ML 2— 8℃ 2：全血溶血試劑 液體 A：甲酸 液體 70ML 室溫 B：碳酸鈉等 液體 32ML 室溫 C：多聚甲醛 液體 14ML 室溫 3：鞘液 液體 20L 室溫 4：清 洗液 液體 5L 室溫 5：熒光微球 液體 10ML 28℃ 質(zhì)控品 BEKAMANCOULTER 產(chǎn)品，未開瓶的試劑于 28℃保存，可在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，稀釋的試劑于 28℃可穩(wěn)定 2 周；每天校準(zhǔn)一次：遇特殊情況隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。 儀器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 操作 ： 1)按照要求，分別向已編好號(hào)的試管中加入 10 ul 單克隆抗體和同型對(duì)照(IgGFITC) 2)分別向試管中加入混勻的 100u1 抗凝血（ 1： 200 稀釋后）。 3)混勻，避光，室溫孵育 2030 分鐘 4)上機(jī)測(cè)樣 報(bào)告結(jié)果 報(bào)告百分?jǐn)?shù) 操作性能 精密度 批內(nèi)五次重復(fù) CV2％ 靈敏度 500— 1000 個(gè)熒光素分子 參考值 IgA% IgG% IgM% IgD% 臨床意義 自身溶血性貧血的分型診斷 方案（ Protocol） 粒細(xì)胞抗體測(cè)定 (流式細(xì)胞儀 ) 醫(yī)院檢驗(yàn)科 操作規(guī)程文件號(hào)： 200 年 月 日起實(shí)施 第 1 版 (共 2 頁(yè) ) 本規(guī)程每 2 年復(fù)審一次 復(fù)審日期： 年 月 日 復(fù)審人： 規(guī)程編寫者： 審 批 者： 批準(zhǔn)日期：
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