【正文】 顆粒在激發(fā)照射下會發(fā)出各種波長的熒光。白細胞自發(fā)熒光強度為650~1150MESF，血小板及其他顆粒自發(fā)熒光更低 流式細胞儀精度：分析(fēnxī)白細胞要求精度在600MESF以內，分析其他細胞或顆粒需要更高的精度：200MESF以內,第十一頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經驗,常見(ch225。nɡ ji224。n)熒光染料列表,第十二頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經驗,常見(ch225。nɡ ji224。n)熒光染料列表,第十三頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經驗,常用熒光(y237。ngguāng)染料種類,488nm藍色激光激發(fā)： FITC(異硫氰酸熒光素）：綠色 530nm PE（藻紅蛋白(d224。nb225。i)）：橙黃色 575nm PECy5（PE的衍生物）：紅色 665nm PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白）：紅色 675nm PI(碘化丙啶）：橙紅色 620nm 637nm紅色激光激發(fā)： APC(別藻蘭蛋白）：紅色 665nm APCCy5(別藻蘭蛋白的衍生物）：深紅色 710nm 365nm紫外光激發(fā)： DAPI（4，6咪基2聯(lián)苯吲哚）：藍色 455nm 532nm綠色激光激發(fā)： PE（藻紅蛋白）：橙黃色 575nm PEDy647 （PE的衍生物）：紅色 647nm PECy5（PE的衍生物）：紅色 665nm,第十四頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經驗,流式細胞儀的原理(yu225。nlǐ)概述,流式細胞儀（Flow Cytometer 簡稱FCM）是一種自動分析細胞的高端技術設備，其原理是懸浮(xu225。nf)在液體中的細胞一個個地依次通過測量區(qū)，當每個細胞通過測量區(qū)并被激發(fā)光照射時產生光信號，然后被光電倍增管（PMT）轉化成電信號，這些信號可以代表熒光、普通光散射、光吸收或細胞的阻抗等。這些信號可以被測量、存貯、顯示，于是細胞的一系列重要的物理特征和生化特征就被快速地、大量地測定。上述特征可以是細胞的大小、活性，核酸的數量、酶、抗原等等。儀器還可以根據所規(guī)定的參量把指定的細胞亞群從整個群體中分選出來。,第十五頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經驗,流式細胞儀的原理(yu225。nlǐ)工作原理(yu225。nlǐ),待測細胞被制備成單個細胞的懸液，經特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進入流動室。流動室內充滿鞘液，在鞘液的約束下，細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，成為細胞液柱。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點稱為測量區(qū)。通過(tōnggu242。)測量區(qū)的細胞被激發(fā)產生熒光。在與入射光束和液柱垂直的方向放置光學系統(tǒng)（透鏡、光闌，濾片和檢測器等）用以收集熒光信號。光電倍增管將收集的光信號轉化為電信號再傳輸至計算機，計算機通過(tōnggu242。)相應的軟件將電信號模擬成圖像。,流動室(Flow Cuvette或 Flow Cell)是儀器核心部件，被測樣品在此與激光相交。流動室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央開一個孔徑為350250um的長方形孔，供細胞單個流過，檢測區(qū)在該孔的中心，這種流動室的光學特性良好，流速較慢,因而細胞受照時間長，可收集的細胞信號光通量大，配上廣角收集透鏡，可獲得很高的檢測靈敏度和測量精度。 流動室內充滿了鞘液,鞘液的作用是將樣品流環(huán)包。鞘液流是一種穩(wěn)定流動的液體，操作人員無法隨意改變其流動的速度,樣品流在鞘流的環(huán)包下形成流體動力學聚焦，使樣品流不會脫離液流的軸線方向，結合樣品噴嘴的特殊結構，從而保證每個細胞通過激光照射區(qū)的時間相等，從而得到準確的細胞信息（散射光和熒光）。,第十六頁，共五十四頁。,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經驗,激光(jīguāng)， 如： 488nm,FL2 PE,SSC,FSC,液路,電子元件部分(b249。 fen),計算機,FL3 PerCP, Cy5,FL1 FITC,光學接收器,第十七頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經驗,流式細胞儀的構造(g242。uz224。o),流動室及液流驅動系統(tǒng) 激光光源及光束(guāngsh249。)形成系統(tǒng) 光學系統(tǒng)（濾光片組） 信號檢測與存儲系統(tǒng) 顯示、分析系統(tǒng),第十八頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經驗,激 光,提供單波長、高強度及穩(wěn)定性高的光照，是細胞微弱熒光快速分析的理想光源(guāngyu225。n)，這是因為由于細胞的快速流動，每個細胞經過光照區(qū)的時間僅為１微秒左右，每個細胞所攜帶熒光物質被激發(fā)出的熒光信號強弱，與被照射的時間和激發(fā)光的強度有關，因此要求細胞必須達到足夠的光照強度。 激光光束在到達流動室前，先經過透鏡，將其聚焦，形成幾何尺寸約即短軸稍大于細胞的直徑的光斑。這種橢園形光斑激光能量分布屬正態(tài)分布。為保證樣品中細胞是一個一個分別受到光照并且受照強度十分一致,須將樣本流與激光束正交且相交于激光能量分布峰值處,臺式機FCM的光路調節(jié)對用戶是封閉的，即安裝時由工程師調試完畢后,無需用戶作任何調