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流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期操作步驟-文庫吧資料

2025-07-13 16:34本頁面

　　

【正文】間不易過長(zhǎng)，以防引起假陽性）↓加入PBS制成細(xì)胞懸液（移液槍吹打68次）↓倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)（單個(gè)分離懸浮）↓將細(xì)胞懸液移入15ml離心管中↓2000rpm離心5min,PBS吸除↓用PBS 清洗細(xì)胞2次（2000rpm，離心5min收集細(xì)胞）↓用400ul 1Binding Buffer 懸浮細(xì)胞(濃度大約為1106 cells/ml)↓在細(xì)胞懸液中加入5ul Annexin VEGFP，輕輕混勻后于28℃避光條件下孵育15 min↓加入10ul PI 后輕輕混勻,于28℃避光條件下孵育5 min↓在1 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè) 流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長(zhǎng)采用Ex.= 488nm雙波長(zhǎng)激發(fā)，Em.= 510 nm檢測(cè)EGFP熒光(FL1 channel)和575 nm的發(fā)射波長(zhǎng)檢測(cè)PI。PI染色后，熒光強(qiáng)度減小而形成一個(gè)DNA含量小于2n的分布區(qū)（亞G1峰）?！龣z測(cè)前先渦旋使細(xì)胞混勻懸浮呈單個(gè)細(xì)胞，然后插入流式細(xì)胞儀上↓流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液，細(xì)胞排成單列由噴嘴中心噴出，形成細(xì)胞液柱↓液柱與激光束相交，細(xì)胞上的熒光染料被激發(fā)產(chǎn)生熒光（488

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