【正文】 白血病免疫分型測(cè)定 (流式細(xì)胞儀 ) 醫(yī)院檢驗(yàn)科 操作規(guī)程文件號(hào)： 200 年 月 日起實(shí)施 第 1 版 (共 3 頁(yè) ) 本規(guī)程每 2 年復(fù)審一次 復(fù)審日期： 年 月 日 復(fù)審人： 規(guī)程編寫(xiě)者： 審 批 者： 批準(zhǔn)日期： 年 月 日 文件分發(fā)部門(mén)和／或個(gè)人 院檔案室保管者： 檢驗(yàn)科 主任： 檢驗(yàn)科 實(shí)驗(yàn)室： 白血病免疫分型測(cè)定 方法 流式細(xì)胞儀 (BeckmanCoulter， 貝克曼庫(kù)爾特 ) 原理 ： 三色直接免疫熒光法。 儀器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 操作 ： 1) 溶血 ： a. OptiLyse C(按說(shuō)明書(shū)步驟溶血 ) b. 使用 COULTER Q— PREP 制備系 統(tǒng) 開(kāi)機(jī) 顯示 READY 燈亮 選擇 35SEC 燈亮 開(kāi) 門(mén) 放入試管關(guān)門(mén) 自動(dòng)進(jìn)行溶血 顯示 READY 燈亮 開(kāi)門(mén) 取出試管再進(jìn)行下一個(gè)樣品測(cè)定。 4．溶血樣本不能用。 3． 樣本白細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)在 109/L 之間。 采集部位 靜脈采血 抗凝劑 EDTA 或肝素抗凝血 要求 1．樣本量至少 1ml。 3)混勻，避光，室溫孵育 2030 分鐘 4)上機(jī)測(cè)樣 報(bào)告結(jié)果 報(bào)告百分?jǐn)?shù) 操作性能 精密度 批內(nèi)五次重復(fù) CV2％ 靈敏度 500— 1000 個(gè)熒光素分子 參考值 IgA% IgG% IgM% IgD% 臨床意義 自身溶血性貧血的分型診斷 方案（ Protocol） 粒細(xì)胞抗體測(cè)定 (流式細(xì)胞儀 ) 醫(yī)院檢驗(yàn)科 操作規(guī)程文件號(hào)： 200 年 月 日起實(shí)施 第 1 版 (共 2 頁(yè) ) 本規(guī)程每 2 年復(fù)審一次 復(fù)審日期： 年 月 日 復(fù)審人： 規(guī)程編寫(xiě)者： 審 批 者： 批準(zhǔn)日期： 年 月 日 文件分發(fā)部門(mén)和／或個(gè)人 院檔案室保管者： 檢驗(yàn)科 主任： 檢驗(yàn)科 實(shí)驗(yàn)室： 粒細(xì)胞抗體測(cè)定 方法 流式細(xì)胞儀 (BeckmanCoulter， 貝克曼庫(kù)爾特 ) 原理 ： 直接免疫熒光法。 試劑 品牌 劑型 規(guī)格 貯存 聯(lián)科 成分 1：?jiǎn)慰寺】贵w 液體 1ML 2— 8℃ 2：全血溶血試劑 液體 A：甲酸 液體 70ML 室溫 B：碳酸鈉等 液體 32ML 室溫 C：多聚甲醛 液體 14ML 室溫 3：鞘液 液體 20L 室溫 4：清 洗液 液體 5L 室溫 5：熒光微球 液體 10ML 28℃ 質(zhì)控品 BEKAMANCOULTER 產(chǎn)品，未開(kāi)瓶的試劑于 28℃保存，可在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，稀釋的試劑于 28℃可穩(wěn)定 2 周；每天校準(zhǔn)一次：遇特殊情況隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。 2．樣本應(yīng)在采集后 6 小時(shí)內(nèi)處理，冷凍的標(biāo)本不能用。 標(biāo)本采集與處理 受檢者的準(zhǔn)備 檢查對(duì)象生活飲食處于日常狀態(tài)，空腹采血。 方案（ Protocol） 紅細(xì)胞抗體測(cè)定 (流式細(xì)胞儀 ) 醫(yī)院檢驗(yàn)科 操作規(guī)程文件號(hào)： 200 年 月 日起實(shí)施 第 1 版 (共 2 頁(yè) ) 本規(guī)程每 2 年復(fù)審一次 復(fù)審日期： 年 月 日 復(fù)審人： 規(guī)程編寫(xiě)者： 審 批 者： 批準(zhǔn)日期： 年 月 日 文件分發(fā)部門(mén)和／或個(gè)人 院檔案室保管者： 檢驗(yàn)科 主任： 檢驗(yàn)科 實(shí)驗(yàn)室： 紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)構(gòu)測(cè)定 （紅細(xì)胞抗體） 方法 流式細(xì)胞儀 (BeckmanCoulter， 貝克曼庫(kù)爾特 ) 原理 ： 直接免疫熒光法。）。 儀器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 操作 ： 富集血小板法 ： 1） 800r/min*15min,取上清， 2）加 4－ 5ml 鞘液， 2021r/min*3min,棄上清，重復(fù)一次。 4．溶血樣本不能用。 3．樣本血小板計(jì)數(shù)應(yīng)在 150450 109/L 之間。 采集部位 靜脈采血 抗凝劑 EDTA 或肝素抗凝血 要求 1．樣本量至少 1ml。 FITC 標(biāo)記的各型多克隆抗體，加到經(jīng)離心富集的血小板中，與血小板膜上的相應(yīng)的 IgGFc 片段結(jié)合，經(jīng)過(guò)洗滌（和固定）等步驟后，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析。 PNH 時(shí) CD55 和 CD59 明顯減低和缺如。 5．混勻、上機(jī)測(cè)樣。 3．向二管中加入 1： 200 稀釋的樣品 100ul（可根據(jù)紅細(xì)胞的數(shù)量調(diào)整），避光 2030 分鐘。避光 2030 分鐘。 2．溶血 ： a. OptiLyse C(按說(shuō) 明書(shū)步驟溶血 ) b. 使用 COULTER Q— PREP 制備系統(tǒng) 開(kāi)機(jī) 顯示 READY 燈亮 選擇 35SEC 燈亮 開(kāi) 門(mén) 放入試管關(guān)門(mén) 自動(dòng)進(jìn)行溶血 顯示 READY 燈亮 開(kāi)門(mén) 取出試管再進(jìn)行下一個(gè)樣品測(cè)定。 儀器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 樣本制備 : (一 )白細(xì)胞 CD55／ CD59 檢測(cè) 1．準(zhǔn)備 2 支流式細(xì)胞儀專(zhuān)用管，分別標(biāo)記。 3．溶血樣本不能用。 采集部位 靜脈采血 抗凝劑 EDTA 或肝素抗凝血 要求 1．樣本量至少 1ml。用流式細(xì)胞儀 檢測(cè) CD55 或 CD59 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。近年的研究表明，紅細(xì)胞和白細(xì)胞膜上 CD55 和 CD59分子的表達(dá)量和缺乏表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量對(duì) PNH 診斷和鑒別有重要意義。 臨床意義 HLA 復(fù)合體位于第 6 號(hào)染色體的短臂上，該區(qū) DNA 片段長(zhǎng)度約 30004000KB，占人體整個(gè)基因的 1/3000， HLAB27 是 HLAI 類(lèi)基因中 B 位