20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀分析技術(shù)應(yīng)用-預(yù)覽頁
【正文】 x236。,分選速度：單位時(shí)間內(nèi)分選的細(xì)胞數(shù)量。)測量點(diǎn)的分選細(xì)胞之間的比率。,（二）分選的技術(shù)(j236。j249。),第九頁，共五十二頁。uch233。,單參數(shù)(cānsh249。 雙參數(shù)信號(x236。)直方圖,第十三頁，共五十二頁。 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細(xì)胞(x236。,第十五頁，共五十二頁。)直方圖,第十八頁，共五十二頁。,Gate設(shè)置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細(xì)胞群分布選定其中想要分析的特定細(xì)胞群，并要求該樣本所有其他(q237。,三、設(shè)門分析(fēnxī)技術(shù),第二十頁，共五十二頁。)門,第二十一頁，共五十二頁。,外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備 分離單個(gè)核細(xì)胞(x236。)法 酶處理法 化學(xué)試劑處理法 表面活性劑處理法 單細(xì)胞懸液的保存 深低溫保存法（一年） 乙醇或甲醇保存法（2周） 甲醛或多聚甲醛保存法（2月）,第二十五頁，共五十二頁。yo)黏著而EDTA可抑制此作用,第二十七頁，共五十二頁。離心后，用sorting buffer調(diào)整細(xì)胞濃度。)Sorting buffer加0.83mM MgCl2以及20 U DNAase II (Sigma D4138)。 PerCPCy5.5/APC 為弱表達(dá)(biǎod225。ng)選擇熒光光譜重疊小的熒光素,Minimize the potential for spectral overlap Spillover estimates available in the spectra viewer,2,第三十頁，共五十二頁。,常用(ch225。)波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光信號，從而檢測到該特定熒光信號。,488nm,575nm,670nm 紅色(h243。i),能量傳遞復(fù)合染料機(jī)制,第三十四頁，共五十二頁。 在單獨(dú)或組合應(yīng)用時(shí)，應(yīng)注意抗體的稀釋度。一種新的抗體組合設(shè)計(jì)后必須進(jìn)行這種比對試驗(yàn)，這種組合一旦應(yīng)用與臨床，不可隨便改換抗體組合或抗體的克隆。y232。 白血病干細(xì)胞的研究一直走在整個(gè)學(xué)科的前沿，引領(lǐng)學(xué)科的發(fā)展。,第三十七頁，共五十二頁。（比如目的分離(fēnl237。,研究(y225。,研究(y225。ngtǐ)的選擇,種屬來源：人 正常造血干細(xì)胞分選標(biāo)記(biāoj236。)的比較,石英杯激發(fā) 原理：激光檢測是在石英杯中進(jìn)行的 優(yōu)點(diǎn)：比色皿提供層流(c233。,空氣激發(fā) 原理(yu225。 缺點(diǎn)：對于敏感性來說，空氣激發(fā)不那么敏感。n)的量化精確調(diào)整,購買補(bǔ)償微球（compbeads），標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中所需要涉及的抗體，孵育后作為(zu242。,第四十三頁，共五十二頁。 gāo)分選效率和精確性。)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，然后對存活的各孔細(xì)胞向各系進(jìn)行分化趨向的統(tǒng)計(jì)。sh249。 FITCIsotype : 設(shè)置陰性對照門, 去除抗體非特異性吸附(xīf249。 CD38FITC : 檢測分選管,第四十八頁，共五十二頁。)的質(zhì)量控制,（一）單細(xì)胞懸液制備(zh236。o)濃度 固定劑,（二）免疫熒光染色(rǎns232。bāo)的培養(yǎng),第五十一頁，共五十二頁。參數(shù)：FS,SS,FL。防止耦聯(lián)染料(rǎnli224。因此組合抗體應(yīng)用濃度應(yīng)比單獨(dú)抗體使用濃
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