【正文】 數(shù)直方圖 多參數(shù)分析,直分析(fēnxī)方圖,設(shè)門分析(fēnxī):REGION和GATE設(shè)置,二、數(shù)據(jù)顯示方式,第十頁，共五十二頁。)直方圖點(diǎn)圖,第十四頁，共五十二頁。,根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形(jǔx237。,淋巴細(xì)胞： 1x HBSS(with Ca++/Mg++)含1% FBS HBSS配方中的陽離子可增加細(xì)胞的生存力。,第二十八頁，共五十二頁。h233。,第三十五頁，共五十二頁。) 單細(xì)胞分選的標(biāo)準(zhǔn)化建立非常重要，尤其我重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究工作主要以血液系統(tǒng)為研究對象，更加有意義。)和增強(qiáng)的樣品聚焦，對于敏感性來說，石英杯激發(fā)系統(tǒng)明顯占優(yōu)。)的模板標(biāo)準(zhǔn)化,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)的需求不同，所以單細(xì)胞分選到不同接收器中，這其中包括24孔板，96孔板，72孔板乃至384孔板等，在每個(gè)機(jī)器上調(diào)整相應(yīng)模板，使其固定為標(biāo)準(zhǔn)化的模板，每次使用直接調(diào)用，不需要重復(fù)進(jìn)行調(diào)整。 FITCIsotype : 單陽管對照, 設(shè)置補(bǔ)償 3/CD38FITC 。ir243。（三）分選后細(xì)胞的培養(yǎng),第五十二頁，共五十二頁。,培養(yǎng)基及血清的選擇 溫度 離心(l237。,第四十七頁，共五十二頁。i)單陽補(bǔ)償管，進(jìn)行上樣通過圈門調(diào)整微球群中位數(shù)，修正所有補(bǔ)償。,分選儀器(y237。)問題,所有的單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)中，干細(xì)胞的單細(xì)胞分選是最為關(guān)鍵，也是最為基礎(chǔ)的一個(gè)環(huán)節(jié)。guǒ)各加20μl，總體積會增至60μl，因此每種抗體的濃度被稀釋成原來的1/3，不再是最佳用量。nɡ)的幾類熒光染料,第三十二頁，共五十二頁。,含有高比例死細(xì)胞的樣本： Sorting buffer加5mM MgCl2以及25~50 μg/mL DNAase I (Sigma D4513)或是(hu242。ngpǐn)制備,第二十四頁，共五十二頁。,（四）流式細(xì)胞儀的多參數(shù)(cānsh249。o)通常采用對數(shù)信號，最常用的是點(diǎn)密圖，在圖中，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，點(diǎn)圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。,FS：反映顆粒(kēl236。,壓電晶體(jīngtǐ),產(chǎn)生(chǎnshēng)機(jī)械振動,不充電(chōng di224。,流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細(xì)胞進(jìn)行定量分析(d236。ngli224。n),充電,（一）分選基本原理,第六頁，共五十二頁。)的大小 SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度 FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少,一、 參數(shù)(cānsh249。,（二）雙參數(shù)(cānsh249。)分析,第十九頁，共五十二頁。,新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備 機(jī)械(jīxi232。 sh236。,用化學(xué)法將兩種不同激發(fā)波長的染料結(jié)合在一起，在488nm激發(fā)光照射下，通過一個(gè)熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射(fāsh232。因此組合抗體應(yīng)用濃度應(yīng)比單獨(dú)抗體使用濃度高。影響單細(xì)胞分選效果的因素有很多。q236。建立良好的補(bǔ)償矩陣，這樣的補(bǔ)償計(jì)算更標(biāo)準(zhǔn)。,CD34PE CD38FITC CD34+ CD38 細(xì)胞 1/ PE Isotype。xīn)速度 無菌操作,（三）分選后細(xì)胞(x2