【正文】 數(shù)直方圖 多參數(shù)分析,直分析(fēnxī)方圖,設門分析(fēnxī):REGION和GATE設置,二、數(shù)據(jù)顯示方式,第十頁，共五十二頁。)直方圖點圖,第十四頁，共五十二頁。,根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形(jǔx237。,淋巴細胞： 1x HBSS(with Ca++/Mg++)含1% FBS HBSS配方中的陽離子可增加細胞的生存力。,第二十八頁，共五十二頁。h233。,第三十五頁，共五十二頁。) 單細胞分選的標準化建立非常重要，尤其我重點實驗室研究工作主要以血液系統(tǒng)為研究對象，更加有意義。)和增強的樣品聚焦，對于敏感性來說，石英杯激發(fā)系統(tǒng)明顯占優(yōu)。)的模板標準化,因為實驗的需求不同，所以單細胞分選到不同接收器中，這其中包括24孔板，96孔板，72孔板乃至384孔板等，在每個機器上調整相應模板，使其固定為標準化的模板，每次使用直接調用，不需要重復進行調整。 FITCIsotype : 單陽管對照, 設置補償 3/CD38FITC 。ir243。（三）分選后細胞的培養(yǎng),第五十二頁，共五十二頁。,培養(yǎng)基及血清的選擇 溫度 離心(l237。,第四十七頁，共五十二頁。i)單陽補償管，進行上樣通過圈門調整微球群中位數(shù)，修正所有補償。,分選儀器(y237。)問題,所有的單細胞實驗技術中，干細胞的單細胞分選是最為關鍵，也是最為基礎的一個環(huán)節(jié)。guǒ)各加20μl，總體積會增至60μl，因此每種抗體的濃度被稀釋成原來的1/3，不再是最佳用量。nɡ)的幾類熒光染料,第三十二頁，共五十二頁。,含有高比例死細胞的樣本： Sorting buffer加5mM MgCl2以及25~50 μg/mL DNAase I (Sigma D4513)或是(hu242。ngpǐn)制備,第二十四頁，共五十二頁。,（四）流式細胞儀的多參數(shù)(cānsh249。o)通常采用對數(shù)信號，最常用的是點密圖，在圖中，每個點代表一個細胞，點圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強度的顆粒數(shù)量的多少。,FS：反映顆粒(kēl236。,壓電晶體(jīngtǐ),產(chǎn)生(chǎnshēng)機械振動,不充電(chōng di224。,流式細胞術最大的特點是能在保持細胞及細胞器或微粒的結構及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細胞進行定量分析(d236。ngli224。n),充電,（一）分選基本原理,第六頁，共五十二頁。)的大小 SS：反映顆粒的內部結構復雜程度 FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少,一、 參數(shù)(cānsh249。,（二）雙參數(shù)(cānsh249。)分析,第十九頁，共五十二頁。,新鮮實體組織單細胞懸液的制備 機械(jīxi232。 sh236。,用化學法將兩種不同激發(fā)波長的染料結合在一起，在488nm激發(fā)光照射下，通過一個熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射(fāsh232。因此組合抗體應用濃度應比單獨抗體使用濃度高。影響單細胞分選效果的因素有很多。q236。建立良好的補償矩陣，這樣的補償計算更標準。,CD34PE CD38FITC CD34+ CD38 細胞 1/ PE Isotype。xīn)速度 無菌操作,（三）分選后細胞(x2