【正文】 化物酶 (Peroxidase) 的顯色底物，在過氧化物酶的催化下，AEC顯色工作液會于反應(yīng)部位產(chǎn)生溶于酒精的紅色沉淀，必須在水溶性介質(zhì)中復(fù)染和封片。tǒng)的免疫組化顯色。 試劑盒組成： 有機(jī)溶劑中的5溴4氯3吲哚磷酸和氮藍(lán)四唑,IHC顯色方法原理及選擇,4. BCIP/INT顯色法 產(chǎn)品描述：BCIP/INT（5溴4氯3吲哚磷酸/p碘硝基四唑）是一種冷藏穩(wěn)定的、單一組分溶液，用于免疫組化、原位雜交、western blot、northern blot和southern blot，特異性地與堿性磷酸酶反應(yīng)生成橙色/棕褐色物質(zhì)。 操作過程中沖洗不充分，建議增加沖洗的次數(shù)(c236。 發(fā)生抗原異位。)過高或孵育時間過長，建議降低一抗?jié)舛?n243。 HRP標(biāo)記二抗孵育時間過長，建議縮短時間。 試劑超過保質(zhì)期，建議實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)試劑的保質(zhì)期。 顯色物質(zhì)與HRP系統(tǒng)不匹配，建議實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)顯色體系。)和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞（或組織）技術(shù)。nlǐ)示意圖,第十四頁，共三十五頁。,免疫熒光結(jié)果(jiē guǒ)分析,第十六頁，共三十五頁。nɡ)熒光素的一抗。,第十七頁，共三十五頁。 碘化丙啶(PI)是一種溴化乙啶的類似物，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。可與F肌動蛋白結(jié)合，使F肌動蛋白保持穩(wěn)定。,各種熒光染料原理(yu225。 一抗/二抗?jié)舛忍停ㄗh增大其濃度。,1.背景過高 一抗質(zhì)量不高，建議(ji224。 封閉不完全，建議增加蛋白封閉時間。 用普通(pǔtōng)的封片劑封片，建議選用防熒光猝滅劑封片。,流式細(xì)胞術(shù)定義及原理 流式細(xì)胞儀（FLOW CYTOMETOR）： 進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器，是集光電子物理，光電測量，計算機(jī)，細(xì)胞熒光化學(xué)(hu224。,流式細(xì)胞術(shù) （Flow Cytometry, FC）,第二十頁，共三十五頁。ngguāng)物質(zhì)（FITC,PE等）,不同(b249。)原理圖,第二十二頁，共三十五頁。n)過程,細(xì)胞(x236。)分析,流式細(xì)胞術(shù)常見結(jié)果(jiē guǒ)分析,第二十五頁，共三十五頁。nɡ)細(xì)胞表型及意義： （Cluster of Differentiation, CD） CD3 總T細(xì)胞 CD4 T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞亞群 CD8 T抑制/細(xì)胞毒細(xì)胞亞群 CD19 B細(xì)胞抗原,LL: CD3CD4 B細(xì)胞(x236。ng)熒光滲漏的過程，如從探測器出去除匹配熒光以外的任何熒光信號。,第二十七頁，共三十五頁。nɡ)檢測原理,在細(xì)胞凋亡早期，磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。因此將 Annexin V 與PI 匹配使用，就可以(kěyǐ)將細(xì)胞凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。n)引自,第三十頁，共三十五頁。 封閉不完全(w225。 信號弱或無信號 無目的蛋白或表達(dá)量極少，建議選用表達(dá)量高的細(xì)胞。 柱形圖分析時出現(xiàn)熒光雙峰 抗原本身特性所決定（比如不同時期的細(xì)胞蛋白表達(dá)量不同） 進(jìn)樣針堵塞，建議清洗管路。,IHC、IF、FC區(qū)別(qūbi233。ir243。d249。封閉不完全，建議增加蛋白封閉時間