基因工程體外重組(帶動畫)-資料下載頁
2025-01-07 17:51本頁面
【正文】 ： 怎樣進行有效的 DNA體外連接？ 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 二、 DNA體外連接應注意的事項 相同的粘性末端才能有效地連接。 盡量避免平端連接。 BamHI BamHI Sau3AI （ 1）用相同的酶切 （ 2）用同尾酶切 BamHI、 BclI、 BglII、 Sau3AI、 XhoII都產生 GATC4個堿基的粘性末端。 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 2. 插入基因的開放閱讀框（ ORF）正確 （ 1） DNA定向插入 由于產生的粘性末端不同，只能以固定方向連接。 雙酶切 EcoRI BamHI EcoRI BamHI EcoRI BamHI 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 （ 2）起始密碼 尤其當 載體上有 ATG起始密碼的時候，更要注意。 ATG G AA TTC 載體 ATG CGG AAT TCT 插入片斷 EcoRI EcoRI ATG G AAT TCT 重組 但移碼突變！ 生命科學學院 3. 防止載體自身環(huán)化連接 （ 1）提高插入片斷的用量 連接反應體系中，插入片斷比載體多 10倍以上。 （ 2）用堿性磷酸酶處理載體 載體切口的 5’磷酸被除去，不能自我連接。 生命科學學院 三、載體和外源 DNA插入片段的連接結果 2. 載體自身環(huán)化連接（能存活） 3. 載體之間互相連接（能存活） 4. 插入片段互相連接（不能存活） 1. 一個載體與一個插入片段重組（能存活） 6. 幾個載體與一個插入片段重組（能存活） 5. 一個載體與幾個插入片段重組（能存活） 生命科學學院 生命科學學院 生命科學學院 涂布氨芐青霉素培養(yǎng)基 生命科學學院 演講完畢，謝謝觀看！
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