基因工程體外重組(帶動(dòng)畫)-閱讀頁
2025-01-17 17:51本頁面
【正文】 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 非酶切位點(diǎn) a）同聚加尾法 缺點(diǎn)： 不能把插入片段再切下來。 GGAATTCC CCTTAAGG EcoRI linker： 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 銜接物(linker)連接 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 銜接物 (linker)連接 優(yōu)點(diǎn)： 1）可以用內(nèi)切酶把插入片段切下來。 adapter的作用 :用 T4DNA連接酶連到 DNA分子的兩端，直接成為人工粘性末端。 防止自我連接： ?先用 堿性磷酸酶 （ CIP）處理接頭 ?以后再用 T4多核苷酸激酶 加上磷酸。 盡量避免平端連接。 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 2. 插入基因的開放閱讀框（ ORF）正確 （ 1） DNA定向插入 由于產(chǎn)生的粘性末端不同，只能以固定方向連接。 ATG G AA TTC 載體 ATG CGG AAT TCT 插入片斷 EcoRI EcoRI ATG G AAT TCT 重組 但移碼突變！ 生命科學(xué)學(xué)院 3. 防止載體自身環(huán)化連接 （ 1）提高插入片斷的用量 連接反應(yīng)體系中，插入片斷比載體多 10倍以上。 生命科學(xué)學(xué)院 三、載體和外源 DNA插入片段的連接結(jié)果 2. 載體自身環(huán)化連接（能存活） 3. 載體之間互相連接（能存活） 4. 插入片段互相連接（不能存活） 1. 一個(gè)載體與一個(gè)插入片段重組（能存活） 6. 幾個(gè)載體與一個(gè)插入片段重組（能存活） 5. 一個(gè)載體與幾個(gè)插入片段重組（能存活） 生命科學(xué)學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院 涂布氨芐青霉素培養(yǎng)基 生命科學(xué)學(xué)院 演講完畢，謝謝觀看！
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