14基因重組和基因工程ppt-powerpoint演示-閱讀頁
2025-01-24 23:37本頁面
【正文】 Bam HⅠ GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + BstⅠ 目 錄 同尾酶 有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全相同 ， 但切割 DNA后 ， 產(chǎn)生相同的粘性末端 ，稱為 同尾酶 。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 目 錄 （三）目的基因 ? cDNA (plementary DNA) ? 基因組 DNA (genomic DNA) 目 錄 （四）基因載體 定義 為攜帶目的基因，實(shí)現(xiàn)其無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 表達(dá)載體 (expression vector) 為使插入的外源 DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的載體稱為 表達(dá)載體 。 目 錄 1. 質(zhì)粒 (plasmid) 特點(diǎn) 能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主復(fù)制；帶有某些遺傳信息 , 會賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀 。 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR) （見第 22章） 目 錄 * 化學(xué)合成法獲取目的基因 由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列 組織或細(xì)胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉(zhuǎn)化菌 限制性內(nèi)切酶 受體菌 基因組 DNA文庫 存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 * 從基因組 DNA文庫獲取目的基因 目 錄 限制酶切位點(diǎn) 限制酶消化 除去中間片段 cos L R cos cos L 左臂 R cos 右臂 真核生物染 色體 DNA 限制酶部分消化 外源 DNA與載體 DNA混合 連接反應(yīng) 體外包裝 用重組噬菌體 感染大腸桿菌 ~20 Kb DNA 片段 cos L R cos ~20 Kb 外源 DNA 片段 基因文庫 目 錄 mRNA cDNA 雙鏈 cDNA 重組 DNA分子 cDNA文庫 反轉(zhuǎn)錄酶 載體 受體菌 復(fù)制 * 從 cDNA文庫獲取目的基因 逆轉(zhuǎn)錄酶 A A A A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶 Ⅰ 堿水解 T T T T 目 錄 目 錄 （三）外源基因與載體的連接 1. 粘性末端連接 方式： (1)同一限制酶切位點(diǎn)連接 (2)不同限制酶切位點(diǎn)連接 配伍末端連接 非配伍末端連接 （二）克隆載體的選擇和構(gòu)建 Bam HⅠ 切割反應(yīng) GGATCC CCTAGG T4 DNA連接酶 15186。C 重組體 配伍末端的連接情況和同一限制酶切位點(diǎn)連接相似。C 重組體 載體自連 目的基因 自連 目 錄 目 錄 3. 同聚物加尾連接 在末端轉(zhuǎn)移酶 (terminal transferase)的作用下，在 DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進(jìn)行粘端連接。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。C 重組體 目 錄 目 錄 4. 人工接頭 (linker)連接 由平端加上新的酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接 。 3180。 三、重組技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 （二）生 物制藥 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長與分化 生長素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗(yàn)、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 目 錄 目 錄 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在 DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 . 便于完全自動化操作，適合大面積、大人群普查。 方式 體細(xì)胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細(xì)胞基因治療 (germ line gene therapy) 目 錄 1. 產(chǎn)前診斷 2. 攜帶者測試 3. 癥候前診斷 4. 遺傳病易感性 （五）遺傳疾病的預(yù)防 目 錄 演講完畢，謝謝觀看！
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