14基因重組和基因工程ppt-powerpoint演示(編輯修改稿)
2025-02-01 23:37 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 又稱 重組 DNA工藝學(xué) 。 目 錄 （二）工具酶 ? 限制性核酸內(nèi)切酶 ? DNA聚合酶 Ⅰ ? 逆轉(zhuǎn)錄酶 ? T4DNA連接酶 ? 堿性磷酸酶 ? 末端轉(zhuǎn)移酶 ? Taq DNA聚合酶 目 錄 重組 DNA技術(shù)中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸內(nèi)切酶 識別特異序列，切割 DNA DNA連接酶 催化 DNA中相鄰的 5180。磷酸基和 3180。羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使 DNA切口封合或使兩個 DNA分子或片段連接 DNA聚合酶 Ⅰ ① 合成雙鏈 cDNA分子或片段連接 ② 缺口平移制作高比活探針 ③ DNA序列分析 ④ 填補(bǔ) 3180。末端 Klenow片段 又名 DNA聚合酶 I大片段，具有完整 DNA聚合酶 I的 5??3?聚合、 3??5?外切活性，而無 5??3?外切活性。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈 DNA 3?末端標(biāo)記等 反轉(zhuǎn)錄酶 ① 合成 cDNA ② 替代 DNA聚合酶 I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸 5180。羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針 末端轉(zhuǎn)移酶 在 3180。羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾 堿性磷酸酶 切除末端磷酸基 目 錄 限制性核酸內(nèi)切酶 定義 限制性核酸內(nèi)切酶 (restriction endonuclease, RE)是 識別 DNA的特異序列 , 并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈 DNA的一類內(nèi)切酶 。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ 目 錄 作用 與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng) ， 限制外源 DNA， 保護(hù)自身 DNA。 分類 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ （基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型） 目 錄 第一個字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名 ， 用大寫； 第二、第三個字母是該細(xì)菌的種名，用小寫； 第四個字母代表株； 用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。 命名 Hin dⅢ 屬 系 株 序 Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌 d株的第三種酶 目 錄 Ⅱ 類酶識別序列特點(diǎn) —— 回文結(jié)構(gòu) (palindrome) 切口 ： 平端切口 、 粘端切口 GGATCC CCTAGG 目 錄 Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 目 錄 同功異源酶 來源不同的限制酶 ， 但能識別和切割同一位點(diǎn) ， 這些酶稱 同功異源酶 。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + BstⅠ 目 錄 同尾酶 有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全相同 ， 但切割 DNA后 ， 產(chǎn)生相同的粘性末端 ，稱為 同尾酶 。 這兩個相同的粘性末端稱為 配伍未端 (patible end)。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 目 錄 （三）目的基因 ? cDNA (plementary DNA) ? 基因組 DNA (genomic DNA) 目 錄 （四）基因載體 定義 為攜帶目的基因，實現(xiàn)其無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 常用載體 質(zhì)粒 DNA 噬菌體 DNA 病毒 DNA 目 錄 克隆載體 (cloning vector) 為使插入的外源 DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計的載體稱為 克隆載體 。 表達(dá)載體 (expression vector) 為使插入的外源 DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的載體稱為 表達(dá)載體 。 目 錄 載體的選擇標(biāo)準(zhǔn) ? 能自主復(fù)制； ? 具有兩個以上的遺傳標(biāo)記物，便于重組體的篩選和鑒定； ? 有克隆位點(diǎn)（外源 DNA插入點(diǎn)），常具有多個單一酶切位點(diǎn)，稱為多克隆位點(diǎn)； ? 分子量小，以容納較大的外源 DNA。 目 錄 1. 質(zhì)粒 (plasmid) 特點(diǎn) 能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主復(fù)制；帶有某些遺傳信息 , 會賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀 。 目 錄 目 錄 目 錄 λ噬菌體 DNA改造系統(tǒng) λgt系列（插入型，適用 cDNA克?。? EMBL系列（置換型，適用基因組克?。? 2. 噬菌體 (phage) M13噬菌體 DNA改造系統(tǒng)（含 lacZ基因） M13mp系列 pUC系列 目 錄 3. 粘性質(zhì)粒 (cosmid) 目 錄 酵母人工染色體 (yeast artificial chromosome, YAC) 細(xì)菌人工染色體 (bacterial ar
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