基因工程(編輯修改稿)
2024-08-14 20:06 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ）同位酶、同裂酶、同尾酶 酶切特點(diǎn) 同位酶：識別相同序列切點(diǎn)不同。 同裂酶：識別位點(diǎn)相同，酶的來源不同。限制酶 HpaⅡ 和MspI是一對同裂酶，共同的靶子序列是 CCGG。 同尾酶：識別位點(diǎn)不同，切出片段有相同末端序列。 Sal I（ 5`G TCGAC3`）和 Xho I(5`C TCGAG3`)的消化片段相連，但所形成的重組片段（ 5`GTCGAG3`）則不能被上述 2種酶的任一種酶識別和切割。 Questions 1基因工程的主要理論依據(jù) :共 6點(diǎn) 2核酸內(nèi)切酶識別序列的規(guī)律 3限制性內(nèi)切酶的命名 4同位酶、同裂酶、同尾酶 識別相同序列切點(diǎn)不同 識別位點(diǎn)相同，酶的來源不同。 識別位點(diǎn)不同，切出片段有相同末端序列。 ?粘性末端： 產(chǎn)生的 DNA片段末端的一條鏈多出一至幾個(gè)核苷酸。 3180。端比 5180。端長的稱為 3180。粘性末端， 5180。端比 3180。端長的稱為 5180。粘性末端。 ?平末端： 產(chǎn)生的DNA片段末端是平齊的。 影響限制性內(nèi)切酶活性的因素 1) DNA的純度 2) DNA的甲基化程度 3) 溫度 4) 緩沖液 5) 反應(yīng)體積和甘油濃度 6) 反應(yīng)時(shí)間 DNA的純度 核酸內(nèi)切限制酶消化 DNA底物的反應(yīng)效率，在很大程度上是取決于所使用的 DNA本身的純度。污染在 DNA制劑中的某些物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)、酚、氯仿、酒精、乙二胺四乙酸 (EDTA)、 SDS(十二烷基硫酸鈉 )、以及高濃度的鹽離子等，都有可能抑制核酸內(nèi)切限制酶的活性。 為了提高核酸內(nèi)切酶對低純度 DNA的反應(yīng)效率，一般采用如下三種方法： ①增加核酸內(nèi)切限制酶的用量，平均每微克底物 DNA可高達(dá) 10單位甚至更多些。 ②擴(kuò)大酶催化反應(yīng)的體積，以使?jié)撛诘囊种埔蛩乇幌鄳?yīng)地稀釋。 ③延長酶催化反應(yīng)的保溫時(shí)間。 在有些 DNA制劑中，尤其是按微量堿法制備的，會含有少量的 DNase的污染。由于 DNase的活性需要有 Mg2+的存在，而在 DNA的貯存緩沖液中含有
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1