基因工程授ppt課件(編輯修改稿)
2025-10-08 18:27 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ①②③ C．②③④ D．②③ D 基因表達載體的作用： a、使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代 b、同時使目的基因能表達和發(fā)揮作用 思考： 作為基因工程表達載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？ 二、基因表達載體的構(gòu)建 —— 核心 不可以。因為目的基因在表達載體中得到表達并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是： （ 1） 生物之間進行基因交流，只有使用 受體生物自身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達； （ 2） 通過 cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄； （ 3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標記； （ 4） 為了增強目的基因的表達水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強子等； （ 5） 有時需要確定目的基因表達的產(chǎn)物存在于細胞的什么部位，往往要加上可以標識存在部位的基因（或做成目的基因與標識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。 二、基因 表達載體 的構(gòu)建 目的： 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 —— 基因工程的核心 a、目的基因 b、啟動子 c、終止子 d、標記基因 e、復(fù)制原點 表達載體 啟動子： 位于基因的首端的一段特殊的 DNA片斷，它是 RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位 ，有了它才能 驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA， 最終獲得蛋白質(zhì) 終止子： 位于基因的尾端的一段特殊的 DNA片斷， 能終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄 標記基因 的作用是 為了 鑒別 受體細胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細胞篩選出來 用一定的 _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出 ____________。 用 _____________切斷目 的基因，使其產(chǎn)生 _____ ____________。 將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的 ______處， 再加入適量 ___________，形成了一個重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制酶 黏性末端 同一種限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA連接酶 過程 : 注意：載體 與 表達載體 的區(qū)別 二者都有標記基因和復(fù)制原點兩部分 DNA片段。表達載體在載體基礎(chǔ)上增加了 目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu) 使用同種限制酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，使其露出相同的黏性末端，再加入 DNA連接酶。 三、將目的基因?qū)胧荏w細胞 轉(zhuǎn)化 目的基因進入 _________內(nèi)，并且在 受體細胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程 受體細胞 穩(wěn)定 表達 將目的基因?qū)? 植物細胞 將目的基因?qū)? 動物細胞 將目的基因?qū)? 微生物細胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— Ca2+處理法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ① 農(nóng)桿菌特點：易感染 雙子葉植物 和 裸子植物 ，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。 ② 原理： Ti質(zhì)粒上的 TDNA可以轉(zhuǎn)移到受體細胞，并整合到受體細胞染色體的 DNA上。 基因槍法： 目的基因?qū)?單子葉植物 細胞 花粉管通道法： 將目的基因?qū)胫参锛毎? 將目的基因?qū)雱游锛毎? 方法：顯微注射法 目的基因表達載體提純 取卵（ 受精卵 ） 顯微注射 轉(zhuǎn)基因受精卵 轉(zhuǎn)基因動物 將目的基因?qū)胛⑸锛毎? ①微生物作受體細胞原因： 繁殖快 、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對少 ②常用菌：大腸桿菌 ③常用法： Ca2+處理獲得感受態(tài)細胞 ④過程： Ca2+處理 大腸桿菌 感受態(tài) 細胞 感受態(tài)細胞 吸收 DNA 表達載體 與感受態(tài) 細胞混合 用 Ca2＋ 處理，增加細
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