wrl基因工程ppt課件(編輯修改稿)
2024-10-08 18:16 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的基因與目的基因的連接、質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接是無效的連接，用兩種限制酶可避免此類現(xiàn)象。 (5)基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程中需加 DNA連接酶，連接脫氧核糖和磷酸。(6)抗生素抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，供重組 DNA的鑒定和選擇。 (7)目的基因是蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將其導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，應(yīng)進(jìn)行目的基因的檢測與鑒定，可根據(jù)受體細(xì)胞是否含有蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，即是否具備吸收蔗糖的能力判斷基因工程是否成功，因而可在含有蔗糖 (唯一碳源 )的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 二、基本步驟： 考點(diǎn)歸納 常用方法： ①從基因文庫獲取目的基因 基因組文庫（一種生物的 所有基因 ） 部分基因文庫：如 cDNA文庫（ 部分基因 ） ②利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 原理：生物體外 DNA雙鏈復(fù)制的原理 ③通過 DNA合成儀直接人工合成 基因較小，核苷酸序列已知，可以人工合成。 考點(diǎn)歸納 啟動子 終止子 目的基因 標(biāo)記基因 目的：是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代 (核心） 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程（叫轉(zhuǎn)化）。 生物種類 植物細(xì)胞 動物細(xì)胞 微生物細(xì)胞 常用方法 受體細(xì)胞 轉(zhuǎn)化過程 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ,基因槍法，花粉管通道法 顯微注射法 Ca2＋處理法 體細(xì)胞 受精卵 原核細(xì)胞 目的基因插入 Ti質(zhì)粒的 TDNA上 → 農(nóng)桿菌 →導(dǎo)入植物細(xì)胞 → 整合到受體細(xì)胞的染色體DNA→ 表達(dá) 目的基因表達(dá)載體提純 → 取卵 (受精卵 )→ 顯微注射 →受精卵發(fā)育 → 獲得具有新性狀的動物 Ca2＋處理細(xì)胞→ 感受態(tài)細(xì)胞 →重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→ 感受態(tài)細(xì)胞吸收 DNA分子 類型 步驟 檢測內(nèi)容 方法 結(jié)果顯示 分子水平 檢測 第一步 第二步 第三步 個(gè)體水平 鑒定 目的基因是否插入受體細(xì)胞染色體的DNA上 DNA分子雜交技術(shù) (DNA和DNA之間 ) 是否成功顯示出雜交帶 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA 核酸分子雜交技術(shù) (DNA和mRNA之間 ) 同上 目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)分子雜交(抗原 —抗體之間 ) 同上 包括抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn)；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品
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