基因工程(文件)
【正文】 質(zhì)、酚、氯仿、酒精、乙二胺四乙酸 (EDTA)、 SDS(十二烷基硫酸鈉 )、以及高濃度的鹽離子等，都有可能抑制核酸內(nèi)切限制酶的活性。 在有些 DNA制劑中，尤其是按微量堿法制備的，會含有少量的 DNase的污染。 DNA的甲基化程度 核酸內(nèi)切限制酶是原核生物限制 — 修飾體系的組成部分，因此識別序列中特定核苷酸 的甲基化作用，便會強(qiáng)烈地影響酶的活性。大多數(shù)核酸內(nèi)切限制酶的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)溫度都是 37℃ ，但也有許多例外的情況，它們要求 37℃ 以外的其它反應(yīng)溫度。 核酸內(nèi)切限制酶的緩沖液 核酸內(nèi)切酶的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的組份包括：氯化鎂、氯化納或氯化鉀、 TrisHCl,223。 緩沖液 Tris— HCl的作用在于使反應(yīng)混合物的 pH恒定在酶活性所要求的最佳數(shù)值的范圍之內(nèi)。 核酸內(nèi)切限制酶的緩沖液 有一部分核酸內(nèi)切限制酶對于鈉離子或鉀離子濃度變化反應(yīng)十分敏感，而另一部分核酸內(nèi)切限制酶則可適應(yīng)較廣的離子強(qiáng)度的變化幅度。 EcoRI限制酶的這種特殊的識別能力，通常叫做星號活性，以 EcoRI*表示。大腸桿菌中存在三種，分別稱為ＤＮＡ聚合酶 Ⅰ 、Ⅱ 和 Ⅲ ；真核細(xì)胞中也分離出五種；目前常用于基因工程的為大腸桿菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ和ＴＤＮＡ聚合酶Ｔ噬菌體感染大腸桿菌所得，而用于PCR擴(kuò)增技術(shù)的多為耐熱的 TaqＤＮＡ聚合酶來自一種水生嗜熱桿菌。 DNA 連接酶 ligase DNA ligase的特點 （ 1）大腸桿菌連接酶：只能連接粘性末端 （ 2） T4噬菌體的連接酶：連接粘性末端、 平末端 3）功用： DNA重組中促使載體與 DNA連接 以自身ＤＮＡ為模板，以脫氧核苷酸為底物催化合成新的ＤＮＡ的酶稱為ＤＮＡ聚合酶。 有些核酸內(nèi)切限制酶的切割特異性，受所用的緩沖液成份的影響比較明顯。 巰基試劑對于保持某些核酸內(nèi)切限制酶的穩(wěn)定性是有用的，而且還可保護(hù)其免于失活。酶活性的正常發(fā)揮，是絕對地需要二價的陽離子，通常是 Mg2+。 DNA的分子結(jié)構(gòu) DNA分子的不同構(gòu)型對核酸內(nèi)切限制酶的活性也有很大的影響。
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1