基因工程體外重組(帶動畫)(存儲版)
【正文】 學院 第一節(jié) DNA的體外重組 c) DNA接頭 (adapter)連接法 adapter:一頭平末端、另一頭粘性末端（某種酶切位點序列）。 雙酶切 EcoRI BamHI EcoRI BamHI EcoRI BamHI 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 （ 2）起始密碼 尤其當 載體上有 ATG起始密碼的時候，更要注意。 BamHI BamHI Sau3AI （ 1）用相同的酶切 （ 2）用同尾酶切 BamHI、 BclI、 BglII、 Sau3AI、 XhoII都產(chǎn)生 GATC4個堿基的粘性末端。 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 生命科學學院 還有哪些方法能夠創(chuàng)造粘性末端？ 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 b）銜接物 (linker)連接 Linker:用化學合成法合成的一段 1012bp的特定限制性內(nèi)切酶識別位點序列的 平端雙鏈 。 注意： 目的基因正反向插入； 載體與多個目的基因片段重組。 adapter的作用 :用 T4DNA連接酶連到 DNA分子的兩端，直接成為人工粘性末端。 ATG G AA TTC 載體 ATG CGG AAT TCT 插入片斷 EcoRI EcoRI ATG G AAT TCT 重組 但移碼突變！ 生命科學學院 3. 防止載體自身環(huán)化連接 （ 1）提高插入片斷的用量 連接反應體系中，插入片斷比載體多 10倍以上。 盡量避免平端連接。 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 非酶切位點 a）同聚加尾法 缺點： 不能把插入片段再切下來。 1 2 3 1 2 3 4 4 3 4 生命科學學院 第
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