基因工程體外重組(帶動畫)(更新版)
【正文】 子之間的連接 （ 2）兩端具有不同粘性末端的 DNA分子之間的連接 2. 平頭末端連接 （ 1）直接連接 （ 2） 人工加尾形成 “ 粘性末端 ” a)同聚加尾法 b)銜接物連接 c) DNA接頭連接法 3. PCR產(chǎn)物的連接 （ 1）在引物的 5’端設(shè)計酶切位點 （ 2）與 T載體直接連接 第一節(jié) DNA的體外重組 生命科學學院 思考： 怎樣進行有效的 DNA體外連接？ 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 二、 DNA體外連接應(yīng)注意的事項 相同的粘性末端才能有效地連接。 （ 1） 直接連接 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 （ 2） 人工加尾形成 “ 粘性末端 ” a）同聚加尾 法 DNA末端轉(zhuǎn)移酶 DNA末端轉(zhuǎn)移酶 能在沒有模板的情況下給 DNA的 3’OH端加上脫氧核苷酸 , 利用 DNA末端轉(zhuǎn)移酶分別給 載體 和 插入片斷 加上互補的核苷酸。 5’端與 3’端并列靠近的時間太短，不容易被連接酶連接。 防止自我連接： ?先用 堿性磷酸酶 （ CIP）處理接頭 ?以后再用 T4多核苷酸激酶 加上磷酸。 生命科學學院 三、載體和外源 DNA插入片段的連接結(jié)果 2. 載體自身環(huán)化連接（能存活） 3. 載體之間互相連接（能存活） 4. 插入片段互相連接（不能存活） 1. 一個載體與一個插入片段重組（能存活） 6. 幾個載體與一個插入片段重組（能存活） 5. 一個載體與幾個插入片段重組（能存活） 生命科學學院 生命科學學院 生命科學學院 涂布氨芐青霉素培養(yǎng)基 生命科學學院 演講完畢，謝謝觀看！
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