基因工程體外重組(帶動畫)-文庫吧
2024-12-28 17:51 本頁面
【正文】 接 第一節(jié) DNA的體外重組 生命科學(xué)學(xué)院 平末端 平末端 SmaI限制酶 第一節(jié) DNA的體外重組 生命科學(xué)學(xué)院 T4 DNA連接酶雖然能連接平末端，但效率很低，只有粘性末端的 1%。 5’端與 3’端并列靠近的時間太短，不容易被連接酶連接。 （ 1） 直接連接 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 （ 2） 人工加尾形成 “ 粘性末端 ” a）同聚加尾 法 DNA末端轉(zhuǎn)移酶 DNA末端轉(zhuǎn)移酶 能在沒有模板的情況下給 DNA的 3’OH端加上脫氧核苷酸 , 利用 DNA末端轉(zhuǎn)移酶分別給 載體 和 插入片斷 加上互補的核苷酸。 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 非酶切位點 a）同聚加尾法 缺點： 不能把插入片段再切下來。 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 生命科學(xué)學(xué)院 還有哪些方法能夠創(chuàng)造粘性末端？ 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 b）銜接物 (linker)連接 Linker:用化學(xué)合成法合成的一段 1012bp的特定限制性內(nèi)切酶識別位點序列的 平端雙鏈 。 GGAATTCC CCTTAAGG EcoRI linker： 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 銜接物(linker)連接 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 銜接物 (linker)連接 優(yōu)點： 1）可以用內(nèi)切酶把插入片段切下來。 2）能給載體連接上Polylinker 缺點： 如果插入片段內(nèi)部也有該酶位點，不能切下完整的插入片段 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 c) DN
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