基因工程體外重組(帶動畫)-預覽頁
【正文】 命科學學院 黏性末端 黏性末端 粘性末端的連接 生命科學學院 生命科學學院 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 1. 粘性末端連接 創(chuàng)造互補粘性末端的方法有哪些？ 同種酶 同尾酶 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 （ 1）兩端具有相同粘末端的 DNA分子之間的連接 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 堿性磷酸酶 ：去掉其 5’末端的磷酸基，以防質(zhì)粒 DNA的自身環(huán)化 。 5’端與 3’端并列靠近的時間太短，不容易被連接酶連接。 GGAATTCC CCTTAAGG EcoRI linker： 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 銜接物(linker)連接 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 銜接物 (linker)連接 優(yōu)點： 1）可以用內(nèi)切酶把插入片段切下來。 防止自我連接： ?先用 堿性磷酸酶 （ CIP）處理接頭 ?以后再用 T4多核苷酸激酶 加上磷酸。 生命科學學院 第一節(jié) DNA的體外重組 2. 插入基因的開放閱讀框（ ORF）正確 （ 1） DNA定向插入 由于產(chǎn)生的粘性末端不同，只能以固定方向連接。 生命科學學院 三、載體和外源 DNA插入片段的連接結(jié)果 2. 載體自身環(huán)化連接（能存活） 3. 載體之間互相連接（能存活） 4. 插入片段互相連接（不能存活） 1. 一個載體與一個插入片段重組（能存活） 6. 幾個載體與一個插入片段重組（能存活） 5. 一個載體與幾個插入片段重組（能存活） 生命科學學院 生命科學學院 生命科學學院 涂布氨芐青霉素培養(yǎng)基 生命科學學院 演講完畢，謝謝觀看！
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