高中生物基因重組與基因工程大學(xué)-預(yù)覽頁
【正文】 。粘性末端 ⑵ 產(chǎn)生 339。539。539。C C C 5 39。C C C 5 39。 同裂酶 —— 同識 同 切 5 39。+A h a ⅢD r a Ⅰ5 39。同裂酶 —— 同識 異 切 GC C A T GG T A C CGG G T A C CC C A T G GG G T A CCCC A T G G+K p n I5 39。+A s p 7 1 8 I5 39。5 39。5 39。同 尾 酶 GC C T A GG A T C CGG A T CC T A GG A T CC T A G5 39。M b o Ⅰ B a m H Ⅰ B g l Ⅱ5 39。5 39。 同尾酶 指來源不同，但識別與切割順序有一定的相關(guān)性的一類酶。 常用限制性核酸內(nèi)切酶的特性 微生物名稱 酶名稱 識別順序 同裂酶 同尾酶 Bacillus amyloliquefaciens H 解淀粉芽孢桿菌 BamHⅠ GGATCC BstⅠ Bgl Ⅱ MboⅠ Bacillius globigil 球芽孢桿菌 Bgl Ⅱ ACATCT Escherichia coli RY13 大腸桿菌 EcoRⅠ GAATTC Haemophilus influenzae 流感嗜血菌 Hind Ⅲ AAGCTT HsuⅠ Providencia stuartii 164 普羅威登細(xì)菌 PstⅠ CTGCAG SalpⅠ Streptomyces albus Subspecies pathocidicus 白色鏈球菌 SalⅠ GTCGAC AvaⅠ XhoⅠ 15 限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用 通過切割不同來源 DNA雙鏈的特異堿基序列， 產(chǎn)生 含有黏性末端或平端的、長度不同的 DNA片段。 E. coli DNA pol. Ⅰ 催化缺口平移 * T * T * T * T Mg 2+ D N a s e I 539。 339。 339。 339。 339。339。539。339。539。 ㈢ Taq DNA pol（耐熱 DNA聚合酶） 作用特點 1） Taq DNA pol催化 DNA合成的最適溫度范圍 70 ? 75℃ ， 2） 95℃ 以上高溫，半小時不失活， 3） 最適合用于 聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR） 。 DNA連接酶的用途 （ 1） 兩個雙鏈 DNA片段連接起來 5ˊ ACG AATTCGT3ˊ T4DNA連接酶 5ˊ ACGAATTCGT3ˊ 3ˊ TGCTTAA GCA5ˊ 3ˊ TGCTTAAGCA5ˊ （ 2） 修補(bǔ)帶有缺口的雙鏈 DNA分子 T4DNA連接 酶 五、堿性磷酸酶 （ alkaline phosphatase） 能夠催化水解去除 DNA或 RNA5ˊ 端的磷酸基團(tuán)。P，再通過激酶作用把放射性核苷酸加到 539。 3180。 其化學(xué)本質(zhì)為 DNA分子 。 （二） 表達(dá)型載體 為了使插入的外源 DNA能夠表達(dá)為多肽鏈而設(shè)計的載體稱為 表達(dá)型載體 。 總而言之，質(zhì)粒載體應(yīng)該是一種分子量較小、高拷貝的“松弛型”質(zhì)粒，且具有一個以上遺傳標(biāo)志和多克隆位點的質(zhì)粒。 溶源性生長 噬菌體感染細(xì)菌后 ， 可將自身 DNA整合 到細(xì)菌的染色體中去 ， 與之 一起復(fù)制 ， 并遺傳給子代細(xì)胞 ， 宿主細(xì)胞不被裂解 。 （三）聚合酶鏈反應(yīng) ( PCR) 在體外， 以目的基因為模板，在 DNA引物、 dNTP、 TaqDNA Pol等存在下，構(gòu)成一個反應(yīng)體系。 （二）平頭末端連接 有些限制酶只能將目的基因和載體 DNA切割成 平端，此時在 T4DNA連接酶 的作用下同樣能連接起 來。 宿主細(xì)胞 進(jìn)行無性繁殖時所采用的受體細(xì)胞 . 重組 DNA導(dǎo)入 宿主細(xì)胞的 類型 轉(zhuǎn)化 以 質(zhì)粒 作載體構(gòu)建的重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程； 轉(zhuǎn)染 以病毒 作載體構(gòu)建的重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程； 轉(zhuǎn)導(dǎo) 以 噬菌體 作載體構(gòu)建的重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程 。 具有抗藥性標(biāo)記的載體，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞后，能 在含抗生素（ Amp或 Tet）的培養(yǎng)平板上生長；未轉(zhuǎn) 化的則不能生長。 （ IPTG 存在下 ） 藍(lán) －白 篩選 示意圖 (二 ) 限制性內(nèi)切酶圖譜鑒定 （三） PCR篩選重組體 抽提少量重組 DNA→ PCR擴(kuò)增 → 電泳鑒定 → 序列分析。 ⑶ mRNA必須相當(dāng)穩(wěn)定，并有效地被翻譯，產(chǎn)生的外 源蛋白質(zhì)必須不為宿主細(xì)胞的蛋白酶所降解。 如已知人類遺傳性疾病約有 3000種，推測可能是由于某些基因結(jié)構(gòu)異常或基因位移等突變所致。 四、改良物種特性 動物藥廠 通過轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)感興趣的基因 ↓ 把 YFG放在 β— 乳球蛋白的啟動子下 ↓ 注入羊卵細(xì)胞 →植入借腹懷孕的母羊體內(nèi) ↓ YFG在乳腺中表達(dá) ↓ 乳汁中提純 YFG蛋白?！? 180?！? 180?！? 180?！? 180。→3 180。端加上磷酸基 B. 去除核酸片段的 3180
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