高中生物基因重組與基因工程大學(xué)(文件)
【正文】 成 cDNA雙鏈 水解回折處單鏈 得到平端雙鏈 cDNA 與載體連接，導(dǎo)入宿主細(xì)胞擴(kuò)增 → 構(gòu)建 cDNA文庫。 （ 一般先合成短片斷 DNA，然后再拼接成長片段 ） 二、 目的基因與載體的連接（ 接 ） （主要有以下 4種連接方式） 1) 粘性末端連接 2） 平頭末端連接 3） 人工接頭法 4） 同源多聚尾連接法 （一） 粘性末端連接 將目的基因和載體用同一種限制酶酶切，產(chǎn)生 相同粘性末端，再通過 DNA連接酶作用將兩者連接起來，構(gòu)成重組 DNA分子。 克隆 從上述無性繁殖細(xì)胞中進(jìn)一步篩選出含目的 DNA的重組體分子即為無性繁殖系或克隆 。 四、重組 DNA的篩選與鑒定（ 篩 ） （ 篩選含重組體的陽性菌落，一般有下列幾種方法 ） 1） 平板篩選 2） 限制酶切圖譜篩選 3） PCR篩選重組體 4） 原位雜交技術(shù) 插入失活 藍(lán)－白篩選 （一） 平板篩選 是指利用載體的遺傳性標(biāo)記在平板上直接篩選的方法。 載體： 編碼 β 半乳糖 宿主： 編碼 β 半乳糖 苷酶 N端 序列 苷酶 C端 序列 α 互補(bǔ) 細(xì)菌表達(dá)： β 半乳糖苷酶活性 ↑ 5溴 4氯 3吲哚 （ Xgal） → 形成 藍(lán)色菌落 當(dāng)在質(zhì)粒中 插入外源 DNA→β 半乳糖苷酶的 N端基因失活 → 不能與宿主 β半乳糖苷酶的 C端 進(jìn)行 α 互補(bǔ) → 產(chǎn)生 白色菌落 。 ⑵ 基因轉(zhuǎn)錄要有啟動子，而啟動子必須能被宿主 細(xì)胞的 RNA聚合酶有效地識別 。 人類基因組圖譜的初步完成，不僅為全部基因的定位建立了一個開放框架，而且為分離、鑒定人類疾病相關(guān)基因提供了參照模板。 如 ， （ 1） 乙型肝炎病毒疫苗（ HBV）、丙型肝炎病毒疫 苗（ HCV）等； （ 2） 有誘發(fā)致癌或產(chǎn)生免疫病理作用的疫苗，如人 T細(xì)胞免疫缺陷病毒（ HITV1）等； （ 3） 常規(guī)效果較差的疫苗，如霍亂和痢疾疫苗等 （ 4） 制備一些多價疫苗等。 五、動物克隆 六、其他應(yīng)用 （略） 基因重組和基因工程（課堂練習(xí)） 1. 基因工程中常用的限制性內(nèi)切酶是 A. Ⅰ 型限制酶 B. Ⅱ 型限制酶 C. Ⅲ 型限制酶 D. 核酸內(nèi)切酶 E. 核酸外切酶 2. 催化 DNA缺口平移反應(yīng)的酶是 A. 末端轉(zhuǎn)移酶 B. DNA聚合酶 Ⅲ C. DNA聚合酶 Ⅱ D. DNA 聚合酶 Ⅰ E. Taq DNA聚合酶 3. Klenow片斷具有下列酶活性 A. 5180。聚合酶活性 B. 5180。外切酶活性 C. 5180。外切酶活性 D. 5180。聚合酶活性 E. 5180。聚合酶活性 4. 堿性磷酸酶的作用是 A. 使核酸片段 3180。端加上磷酸基 E. 使核酸鏈水解斷裂 5. 下列是關(guān)于基因克隆常用載體的敘述，正確的是 A. 在連接酶作用下，載體可與目的 DNA連接構(gòu)成重組體 B. 載體是將目的 DNA引入宿主細(xì)胞的運(yùn)載蛋白 C. 載體是將目的 DNA引入宿主細(xì)胞的 DNA分子 D. 常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體和病毒等 E. 載體可將目的 DNA運(yùn)載入宿主細(xì)胞內(nèi)而本身不進(jìn)入細(xì)胞 6. DNA重組應(yīng)包括下列過程 A. 分離并獲得目的基因和載體 B. 連接目的基因和載體構(gòu)成重組體 C. 將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi) D. 從轉(zhuǎn)化菌落中篩選并鑒定含陽性重組體的菌落 E. 以上都包括 7. 目的 DNA可來自 A. 直接從組織中提取 B. 基因文庫 C. cDNA文庫 D. PCR擴(kuò)增 E. DNA合成儀合成 8. 目的 DNA與載體的連接方法可有 A. 粘性末端連接 B. 平頭末端連接 C. 同源多聚尾連接 D. 人工接頭法 E. 載體分子的自身環(huán)化連接 。端磷酸基 C. 去除核酸片段的 5180。 外切酶和 3180。 和 3180。聚合酶 和 3180。 和 3180。外切酶和 5180。 1. 分離體細(xì)胞 （ 先處于 “ 饑餓 ”的 “ 靜止?fàn)顟B(tài) ” ） → 使 “ 關(guān)閉 ” 的基 因 全 部 “ 打開 ” 。如果 利用分子生物學(xué)技術(shù)，將患者疾病基因與正?；驁D譜作對照分析 ，必將有助于闡明遺傳病的分子機(jī)制，這對遺傳病的基因治療將起到不可估量的推動作用。 第四節(jié) 重組技術(shù)在醫(yī)學(xué)和制藥工業(yè)中的應(yīng)用 一、疾病基因的發(fā)現(xiàn) 1990年 美國科學(xué)家率先啟動 人類基因組計劃（ HGP）， 計劃歷時 15年，至 2022年完成； 2022年 2月 12日 由 Since和 Nature雜志同時向世界宣布，人類基因組 3X109bp的最新圖譜，約含 3?4萬個基因； 整個人類基因組的全部核苷酸序列不久即將完成。 （四） 原位雜交技術(shù) 獲取 TTTTAAAA質(zhì)粒外源 DNA 分子T T AA T T AAAA T TE c o R IE c
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