【正文】 HkD２） 甲基化酶的用途 如： M.甲基化酶的種類與識(shí)別順序1.5.3.酶切位點(diǎn)與識(shí)別位點(diǎn)不一致，切點(diǎn)常在識(shí)別位點(diǎn)的一側(cè)， 1DNA重組2.（四）、異源同序酶（isoschizomer，同裂酶）２） ５ ’端突起 ，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 Pst IT5’G5’ＧＧＡＴＧ (Ｎ )93’GGCC Not BamHI1.HindⅢ — Haemophilus　例如： HindⅢ 　　前三個(gè)字母來自于菌種名稱H. influenzae， “ ｄ ” 表示菌系為ｄ型血清型； “Ⅲ” 表示分離到的第三個(gè)限制酶。1.III型 ： 修飾酶與Ｉ型酶相同， hsdＭ與 hsdＳ基因產(chǎn)物結(jié)合成一亞單位，限制酶是獨(dú)立存在的。核酸連接酶 — 用 于 DNA和 RNA的連接 中藥化學(xué)組 ：中藥有效成分包括較單一的成分和多種成分種植面積迅猛發(fā)展。1960元 /ug胰島素 回報(bào)很高。生物制藥產(chǎn)業(yè)化特點(diǎn)高技術(shù) ：高層次人才，高新技術(shù)手段，多學(xué)科滲透高投入 ：在國(guó)外，一個(gè)生物藥品平均要投入 1~3億美元，并隨著開發(fā)難度的增大 ,有逐步增高的趨勢(shì)長(zhǎng)周期 ：國(guó)際上，一個(gè)新的生物藥品需要 6~8年時(shí)間高風(fēng)險(xiǎn) :傳統(tǒng)的酶工程主要是指天然酶制劑在工業(yè)上的大規(guī)模生產(chǎn)與應(yīng)用。蛋白質(zhì)功能預(yù)測(cè)和分析蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)分析 從這些篩選出來的受體細(xì)胞克隆，提取出已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因，供進(jìn)一步分析研究使用。重組 DNA技術(shù) (rebination 利用 DNA體外重組或 PCR擴(kuò)增技術(shù)從某種生物基因組中分離感興趣的基因，或是用人工合成的方法獲取基因，然后經(jīng)過一系列切割，加工修飾，連接反應(yīng)形成重組 DNA分子，再將其轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞，以期獲得基因表達(dá)的過程 .基因工程 (gene engineering)常和以下名稱混用遺傳工程 (geic基因工程中的工具酶第三節(jié) 基因與載體的重組與導(dǎo)入受體細(xì)胞第六節(jié) cloning)。作名詞時(shí)指含有某目的 DNA片段的重組 DNA分子或含有該重組分子的無性繁殖系 .作動(dòng)詞時(shí)是指基因的分離與重組過程。大學(xué)將人肥胖基因出售 美元 （ 1995年 3月）Amgen公司將 FKBP神經(jīng)免疫因子配體轉(zhuǎn)讓達(dá) （ 1997年）Millennium公司以 向 Bayer公司轉(zhuǎn)讓 225種基因的開發(fā)權(quán)（ 1998年 9月）蛋白質(zhì)工程的概念在基因工程技術(shù)對(duì)編碼蛋白質(zhì)的基因的了解基礎(chǔ)上，對(duì)蛋白質(zhì)的氨基酸序列、結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行分析，進(jìn)而通過對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、氨基酸序列和翻譯后的修飾等手段改變甚至創(chuàng)造出新的和更有效的蛋白質(zhì)。污染治理；廢物利用；污染物生物降解生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生物技 術(shù)產(chǎn)業(yè) ： 利用 細(xì) 胞和生物分子 進(jìn) 行 藥品、 農(nóng)產(chǎn) 品生 產(chǎn) 開 發(fā) 和 環(huán) 境治理的 產(chǎn)業(yè) ，該產(chǎn)業(yè) 技 術(shù) 由醫(yī) 藥 生物技 術(shù) 、 農(nóng)業(yè) 生物技術(shù) 和 環(huán) 境生物技 術(shù) 共同 組 成醫(yī) 藥 生物技 術(shù) 重點(diǎn)攻克癌癥、艾滋病、老年癡呆癥、帕金森病、心 臟 病、糖尿病等危害人 類 的 頑 疾農(nóng)業(yè) 生物技 術(shù) 著眼于提高 農(nóng)產(chǎn) 品的 產(chǎn) 量和質(zhì) 量。一個(gè)新藥品的開發(fā)，經(jīng)過一系列的程序 研發(fā)、中試、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、 I~III期臨床實(shí)驗(yàn)，上市和嚴(yán)格的藥政監(jiān)督管理。1072元 /ug白細(xì)胞介素 2遺傳疾病 53植物反應(yīng)器生產(chǎn)稀有蛋白。中藥基因組 —— 利用現(xiàn)代生物技術(shù)研究分析中藥對(duì)人體（細(xì)胞）基因表達(dá)（蛋白質(zhì)）的影響。中藥化學(xué)組 —— 利用現(xiàn)代儀器分析技術(shù)分析有效成分及其藥物代謝、動(dòng)力學(xué)。限制酶的用途（一）、限制修飾系統(tǒng)的種類1.and(II)— StreptomycesNGATCN； AvaIIN3’ＣＣＴＡＣ (Ｎ )135’EcoRITG5’3’GACGTC5’粘性末端能與另一個(gè)相同的粘連末端相連接，任何兩個(gè)具有相同識(shí)別位點(diǎn)的 DNA分子經(jīng)限制酶切割后能夠重新連接成新的重組 DNA分子。平齊末端GGG3’ａ）切點(diǎn)在識(shí)別順序之外的，如： FokI FokAvaI1.CCCGC（五）、 1.限制酶（物理）圖譜繪制2.EcoRIGGATmCC— BamHI(G?GATCC)２） b.３） M． TaqI（ TCGmA） HindII（ GTPyPuAC）：GTCAAC， GTTAAC， GTCGmAC， GTTGAC3.核酸酶 H活性：除去 DNARNA雜交分子中的RNA分子， pH反應(yīng)底物：互補(bǔ) dsDNA2)4.核酸（ DNA）標(biāo)記斷口缺口 (gap)斷口 (cut)339。 339。539。HO339。OH339。339。3c 1a3c1a3ca4a539。I1.或 Ca2+DNA分子上將形成切口，不同類型二價(jià)陽離子對(duì)兩條鏈上切口位置形成有以下影響： Mg2)Mn++存在時(shí) 3’5’I四、 DNA聚合酶（一）、 DNA聚合酶 I（ polI）具 3’→5’ 外切酶活性IIIpolI的特點(diǎn) 3.DNA聚合酶I的兩倍 dNTP（三）、 Taq→ 5’3’5’DNA連接酶平整末端的相連5’AOHAOH3’TTCGAA5’TTCGAPAHOPAGCT質(zhì)粒 DNA分子可以持續(xù)穩(wěn)定地處于染色體外地游離狀態(tài)，但在一定地條件下又會(huì)可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體地復(fù)制而復(fù)制，并通過細(xì)胞分裂傳遞到后代。這樣的兩種質(zhì)粒稱為不親和質(zhì)粒。pCR, 這種指示可以是選擇性的（ Ampr氨芐青霉素抗性基因 （ Cmlr新霉素 (Neor)和 G418抗性 (G418r)基因AAs，基因產(chǎn)物裝配為四聚體后才有酶活。 lacZ（ lacZα）中含有多克隆位點(diǎn)，當(dāng)無外源 DNA片段插入時(shí)，質(zhì)粒表達(dá) β— 半乳糖苷酶的 α肽，與缺失突變體宿主菌（不能編碼 α肽）表達(dá)的 lacZ基因產(chǎn)物（ lacZα編碼 5‘端可容許很大的變化（如加入多克隆位點(diǎn)）而不影響酶活性 病毒型載體 — 環(huán)狀、線狀、 ss和 dsDNA分子，形成病毒顆粒 （ 3） .混合型載體 — 具質(zhì)粒和病毒特性，特性的轉(zhuǎn)換依賴于宿主細(xì)胞生物學(xué)特性 根據(jù)載體功能劃分用途 :酶切反應(yīng)時(shí)仍未被作用的 pBR322或 pUC18分子 b. 酶切后的載體分子經(jīng)自我連接又形成載體分子普通型載體 pBR322的結(jié)構(gòu)圖pUC18和 pUC19載體（ 2）、表達(dá)型載體（ expressionb.Ⅰ 型 ：轉(zhuǎn)錄起始區(qū)（調(diào)控序列 +啟動(dòng)子） +轉(zhuǎn)錄起始區(qū)終止子 Ⅲ 型 :a.TcS)Apr （ 3）、多克隆位點(diǎn)區(qū)（ MCS） 由人工合成的多個(gè)單一酶切位點(diǎn)構(gòu)成。如： DH DH5α 、 E .coliDH5αF’ 1） 合適的克隆位點(diǎn) 單克隆位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)演講完畢，謝謝觀看！