基因工程的發(fā)展-文庫吧資料
2025-01-11 17:41本頁面
【正文】 5’5’3’3’和 PCR 引物延伸 (75℃) Taq 與 DNA引物退火 (45℃ )DNA擴增技術(shù)又稱為 聚合酶鏈式反應(yīng) ，它包括以下三個步驟：主要用于 DNA的體外擴增，經(jīng) 25次循環(huán)后才進入酶的反應(yīng)穩(wěn)定期，一個 DNA用途：分離自水生棲熱菌，分子量為 94,000，最適反應(yīng)溫度 75℃ ， DNA聚合酶1.無 dNTPDNA末端修飾 缺失cpm/μgDNA)。2.其切除速度分別為 40和 為 pol5’ →3 ’ 聚合酶活性， 15001.T4和 3)常用大片段（二）、 切口移位制備探針 合成第二條 cDNA補齊 5’突起端除去 3’端突起的單鏈 DNA（在無 dNTP時）用途 外切酶活性 聚合酶活性， 5’ →3 ’ ,polIK)具 3’→5’ 和 5’ →3 ’ 外切酶活性polII具 3’→5’ 和 5’ →3 ’ 外切酶活性I1.的切口移位 Pol3’DNaseI與Pol3’5’ Mg++存在時 DNaseI作用特點DNaseI基因突變時產(chǎn)生切口 制備 RNA樣品時除去 DNA分子切口移位，制備 DNA探針用途2+存在時，兩條鏈上的切口獨立無關(guān)， Mn2+存在時，兩條鏈上的切口幾乎在同一位置當酶濃度很低時， ds,2+,特點： 具內(nèi)切酶活性，作用于 dsDNase H2.用于除去 DNA樣品中的 RNA分子A1.HOOH339。HOOH339。PP539。PP539。ExoIII cba432P539。HOP539。P539。P539。 P539。P539。OH339。HOOH339。HO339。HO339。HO339。P339。P 539。P 539。P539。HOP539。HO切口 (nick)缺口 ,在一定條件下， ExoIII不能作用 GC富集區(qū) (來自于 cDNA加尾 )dsDNA結(jié)構(gòu) :2)基因突變 缺失2)反應(yīng)產(chǎn)物： 5’單磷酸核苷和具缺口或 5’端突起的dsDNA，過度反應(yīng)將導致 DNA降解堿基釋放速度： CATG1)外切酶活性特點3.3’磷酸酶活性：除去 3’磷酸基后形成 3’OH端，有利于 DNA聚合酶反應(yīng)， pH3)dsDNA， pH2.kD一般特點： ２） 改變某些限制酶識別順序的特異性，以便重組體的形成甲基化酶的用途 抑制不同種限制酶的部分活性如： M.順序邊界重疊 ClaI（ ATCGmAT） TaqI（ TCGmA）順序完全重疊 抑制不同種限制酶的活性抑制同種限制酶的活性 II型甲基化酶對限制酶活性的影響 CGGHpaICGGA如： M.三個系統(tǒng)中的甲基化酶可使細菌 DNA分子中的胞嘧啶和腺嘌呤發(fā)生甲基化，形成 5’甲基胞嘧啶和 6’甲基腺嘌呤。甲基化酶的種類與識別順序1.kD 。5.4.3.酶切位點與識別位點不一致，切點常在識別位點的一側(cè)， 1具有特異型核苷酸順序識別能力，但該順序不具有對稱結(jié)構(gòu)。4.突變分析（ RFLP分析）2.DNA重組限制酶的用途GGSacIGGGGGTAC2）切割位點的異同 KpnI2.定義：能識別相同序列但來源不同的兩種或多種限制 （四）、異源同序酶（isoschizomer，同裂酶）CCCCGGG。3’CCTAC(N)135’GGATG(N)95’GGATG(Ｎ )93’I４）非互補的粘性末端3’GGG3’GGGCCC5’5’CCC5’CCCGGG3’３） 在進行 DNA重組時，應(yīng)用限制酶同時切割目的基因和載體 DNA，使之產(chǎn)生相對的粘性末端，然后再將二者連接成重組 DNA分子HOG5’3’CTTAAPPAATTC3’5’GOHEcoRI２） ５ ’端突起 ，個數(shù)為２或４個核苷酸 Pst I１） ３ ’端突起 ，個數(shù)為２或４個核苷酸４）切點大多數(shù)在識別順序之內(nèi)，也有例外AT3’CTA5’G３）對稱性 — 雙 對稱２）富含ＧＣ外側(cè)，產(chǎn)生５ ’端突起5’ＧＧＡＴＧ (Ｎ )93’ICCGGN’N’N’N’N’CCGGGGCCNNGGCC NotPuGG(A/T)CCPyGGATCC： PpuMI BamHI1.(Ⅱ )（三）、限制酶的特點ⅢSacIHindⅢ — HaemophilusRI 例如： HindⅢ 前三個字母來自于菌種名稱H. influenzae， “ ｄ ” 表示菌系為ｄ型血清型； “Ⅲ” 表示分離到的第三個限制酶。2.狹義指 II型限制酶。1.上述三個系統(tǒng)中，只有 II型限制酶與甲基化酶具有相當高的核苷酸識別特異性，因而被廣泛用于基因工程中。III型 ： 修飾酶與Ｉ型酶相同， hsdＭ與 hsdＳ基因產(chǎn)物結(jié)合成一亞單位，限制酶是獨立存在的。II型 ： 限制與修飾基因產(chǎn)物獨立起作用，在 Ｅ . coli中這兩種基因位于質(zhì)粒上。specificity）位于染色體上，三個基因構(gòu)成一個復合體，限制酶需要 ATP、Mg2+、 SAM（５ — 腺苷甲硫氨酸），無特異切割位點。modificationforI型 ： 由三個基因構(gòu)成， hsdR； hsdM； hsdS（host其它酶類 用于生物細胞的破壁，轉(zhuǎn)化，核酸純化，檢測等一、限制性內(nèi)切酶（一）、限制修飾系統(tǒng)的種類（二）、限制性內(nèi)切酶的定義、命名（三）、限制酶的特點（四）、異源同序酶（ isoschizomer，同裂酶）（五）、 核酸連接酶 — 用 于 DNA和 RNA的連接 核酸酶 — 用 于 DNA和 RNA的非特異性切割 DNA甲基化酶 — 用 于 DNA分子的甲基化 中藥新劑型第二節(jié) 基因工程中的工具酶限制性內(nèi)切酶 — 主 要用于 DNA分子的特異切割 中藥臨床藥效 的科學評價與分析方法生物技術(shù)的應(yīng)用中藥化學組 ：中藥有效成分包括較單一的成分和多種成分中藥藥靶 （基因）或作用位點基因的尋找世界轉(zhuǎn)基因作物大田釋放情況()轉(zhuǎn)基因作物特性 批準項數(shù) 所占比例抗除草劑 1297 %抗蟲 1046 %提高產(chǎn)品質(zhì)量 886 %抗病毒 436 %改善農(nóng)學性狀 211 %抗真菌病 208 %其他 303 %總計 4387 100%轉(zhuǎn)基因作物種植面積生物技術(shù)與傳統(tǒng)中藥中藥現(xiàn)代化 —— 核心是建立與現(xiàn)代基因?qū)W說相應(yīng)的現(xiàn)代中藥理論現(xiàn)代中藥理論的建立 —— 確立中藥與基因表達的關(guān)系由單個質(zhì)量性狀基因向多基因數(shù)量性狀轉(zhuǎn)變。種植面積迅猛發(fā)展。1752妊娠預防 3生長發(fā)育不良癥 7不育癥 11血液疾病 13消化系統(tǒng)疾病 移植 19皮膚病 22艾滋病及相關(guān)疾病 呼吸系統(tǒng)疾病 26
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