【正文】 如： DH DH5α 、 E .coliDH5αF’ 1） Apr轉(zhuǎn)錄起始區(qū)終止子 b.用途 :lacZα編碼 5‘端可容許很大的變化（如加入多克隆位點）而不影響酶活性 lacZ（ lacZα）中含有多克隆位點，當無外源 DNA片段插入時，質(zhì)粒表達 β— 半乳糖苷酶的 α肽，與缺失突變體宿主菌（不能編碼 α肽）表達的 lacZ基因產(chǎn)物（ 新霉素 (Neor)和 G418抗性 (G418r)基因 pCR,質(zhì)粒 DNA分子可以持續(xù)穩(wěn)定地處于染色體外地游離狀態(tài)，但在一定地條件下又會可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體地復(fù)制而復(fù)制，并通過細胞分裂傳遞到后代。平整末端的相連3’→ 3.III3’5’Mn++存在時 I1.aca3c 1339。HO339。 339。核酸（ DNA）標記4.2)核酸酶 H活性：除去 DNARNA雜交分子中的RNA分子， pH３） GGATmCC— BamHI(G?GATCC)EcoRI限制酶（物理）圖譜繪制1.CCGCGGG3’平齊末端3’GACGTC5’G5’EcoRI3’ＣＣＴＡＣ (Ｎ )135’NNGATCN； AvaII限制酶的用途（一）、限制修飾系統(tǒng)的種類1.中藥化學(xué)組 —— 利用現(xiàn)代儀器分析技術(shù)分析有效成分及其藥物代謝、動力學(xué)。植物反應(yīng)器生產(chǎn)稀有蛋白。3一個新藥品的開發(fā)，經(jīng)過一系列的程序 研發(fā)、中試、動物實驗、 I~III期臨床實驗，上市和嚴格的藥政監(jiān)督管理。污染治理；廢物利用；污染物生物降解生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生物技 術(shù)產(chǎn)業(yè) ： 利用 細 胞和生物分子 進 行 藥品、 農(nóng)產(chǎn) 品生 產(chǎn) 開 發(fā) 和 環(huán) 境治理的 產(chǎn)業(yè) ，該產(chǎn)業(yè) 技 術(shù) 由醫(yī) 藥 生物技 術(shù) 、 農(nóng)業(yè) 生物技術(shù) 和 環(huán) 境生物技 術(shù) 共同 組 成醫(yī) 藥 生物技 術(shù) 重點攻克癌癥、艾滋病、老年癡呆癥、帕金森病、心 臟 病、糖尿病等危害人 類 的 頑 疾農(nóng)業(yè) 生物技 術(shù) 著眼于提高 農(nóng)產(chǎn) 品的 產(chǎn) 量和質(zhì) 量。大學(xué)將人肥胖基因出售 美元 （ 1995年 3月）Amgen公司將 FKBP神經(jīng)免疫因子配體轉(zhuǎn)讓達 （ 1997年）Millennium公司以 向 Bayer公司轉(zhuǎn)讓 225種基因的開發(fā)權(quán)（ 1998年 9月）蛋白質(zhì)工程的概念cloning)?；蚬こ讨械墓ぞ呙傅谌?jié) 重組 DNA技術(shù) (rebination蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)分析 傳統(tǒng)的酶工程主要是指天然酶制劑在工業(yè)上的大規(guī)模生產(chǎn)與應(yīng)用?；貓蠛芨?。1960元 /ug胰島素 1.HindⅢ — Haemophilus BamHI NotGGCC5’GPst I（四）、異源同序酶（isoschizomer，同裂酶）DNA重組3.甲基化酶的種類與識別順序1.如： M.kDdsDNA， pH在一定條件下， ExoIII不能作用 GC富集區(qū) (來自于 cDNA加尾 )dsDNA結(jié)構(gòu) :HOOH339。3ExoIII ,3’DNaseI與Pol和 3)常用大片段（二）、 5’ →3 ’ 聚合酶活性， 1500無 dNTP用途：3’3’ 3’只連接 ds相同或相容粘性末端的連接3’TTCGAPOHA5’因此，作為載體的質(zhì)粒應(yīng)該是松弛型的。al)標記基因的作用 Tcr） Apr抗性基因編碼一種分泌到細菌細胞周間質(zhì)的酶，可特異地 切割 氨芐青霉素的 β— 內(nèi)酰胺環(huán)，使氨芐青霉素失活。c.特點 :d.轉(zhuǎn)化單元 宿主細胞轉(zhuǎn)化不同類型載體中所缺少的部分必須由外源基因提供。Tcs）不表達，選表達載體 (外源基因必須表達，表達產(chǎn)物必須具備活性 ) ⅱ) 免疫法：與上同，但表達產(chǎn)物不一定具生物活性 ⅲ) 雜交法：各種載體均可2) 目的基因的鑒定 次克隆：選用質(zhì)粒載體，限制酶譜分析，基因結(jié)構(gòu)分析等 定序：定序載體（ M13mp系列），其他質(zhì)粒載體（如 pUC系列，pBR322， T3， T7， SP6啟動子載體）3) 基因表達與調(diào)控 外源基因可表達 — 普通載體 。pUC18和 pUC19載體利用菌落顏色篩選重組子分子克隆載體的選擇1.ApS重組分子 I 重組分子 Ⅱ (Aps具有較高的拷貝數(shù)，經(jīng)過氯霉素擴增后，每個細胞中可累積 10003000個拷貝，為重組體 DNA的制備提供了極大的方便。翻譯起始區(qū) 結(jié)構(gòu) :βLacZ基因的結(jié)構(gòu)與產(chǎn)物pUC18這兩個部分可獨立存在， Kanr等 抗性基因均可使這類抗生素 磷酸化 ，使之不能進入細胞內(nèi)。Chlorophenicol可結(jié)合在核糖體 50* ： 進一步完善載體功能以滿足基因工程克隆中的不同要求，如 M13mp系列載體，含 T3， T7，sp6啟動子載體，表達型載體及各種探針型載體。TTCGAA5’T3’5’AHOPAGCTPAGCTT3’2.1.3’cpm/μgDNA)。其切除速度分別為 40和 外切酶活性 具 3’→5’ 和 5’ →3 ’ 外切酶活性1.3’5’2.HOOH339。b P539。P 539?；蛲蛔?缺失反應(yīng)產(chǎn)物： 5’單磷酸核苷和具缺口或 5’端突起的dsDNA，過度反應(yīng)將導(dǎo)致 DNA降解3.3’磷酸酶活性：除去 3’磷酸基后形成 3’OH端，有利于 DNA聚合酶反應(yīng)， pH如： M.抑制同種限制酶的活性 突變分析（ RFLP分析）2.3’CCTAC(N)135’GGATG(N)95’GGATG(Ｎ )93’４）切點大多數(shù)在識別順序之內(nèi)，也有例外3’CI(Ⅱ )（三）、限制酶的特點2.II型 ： 限制與修飾基因產(chǎn)物獨立起作用，在 Ｅ . coli中這兩種基因位于質(zhì)粒上。核酸酶 — 用 于 DNA和 RNA的非特異性切割 1757不育癥 11血液疾病 13消化系統(tǒng)疾病 /mg美國生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展情況 美國生物制藥產(chǎn)品種類及數(shù)量（ PHRAM）疾病種類 高品質(zhì)新品種 將重組 DNA分子轉(zhuǎn)移到適當?shù)氖荏w細胞 (亦稱寄主細胞 )，并與之一起增殖。 目的基因的表達第一節(jié) 基因工程的概念及其主要內(nèi)容一、基因工程的概念：在體外，將帶有目的基因的外源 DNA片段連接到能夠自我復(fù)制的并具有選擇記號的載體分子上，形成重組 DNA分子。轉(zhuǎn)基因植物 ：抗病蟲害新品種、抗逆新品種、 生物反應(yīng)器 ：利用動植物細胞或組織作為生物反應(yīng)器，直接生產(chǎn)有用蛋白質(zhì)輕工與食品11腫瘤疾病 技術(shù)平臺 ：大規(guī)?；虮磉_分析（基因芯片、 SAGE、蛋白質(zhì)組等技術(shù)）以及相關(guān)信息數(shù)據(jù)庫的建立2.achromagenes IMboIGCGGCCGC； SfiI FokC3’5’CTGCAG3’3’GCCC